Question

8．利用微生物轉(zhuǎn)化膽固醇在醫(yī)藥生產(chǎn)上有重要作用．實(shí)驗(yàn)人員從土壤中篩選膽固醇轉(zhuǎn)化菌株的過程如圖．請(qǐng)分析回答下列問題：

（1）實(shí)驗(yàn)人員將土壤樣品接種到富集培養(yǎng)液①中培養(yǎng)時(shí)，需要將其置于搖床上不斷振蕩，其主要的作用有增加溶解氧
（2）培養(yǎng)一段時(shí)間后，從①中取適量培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移接種到選擇培養(yǎng)液②中培養(yǎng)36h后，再轉(zhuǎn)移到相同的選擇培養(yǎng)液③中培養(yǎng)．與培養(yǎng)液①不同，培養(yǎng)液②③成份的主要特點(diǎn)是以膽固醇為唯一碳源．在相同的培養(yǎng)液②③中轉(zhuǎn)移培養(yǎng)主要是為了避免原培養(yǎng)液中的干擾，同時(shí)，又可以篩選純化獲得可轉(zhuǎn)化膽固醇的菌種
（3）從③中取適量的培養(yǎng)液涂布到④之前，需要，涂布前需將涂布器灼燒并冷卻
（4）根據(jù)⑤中菌落的形態(tài)特征，選取所需的菌種接種到培養(yǎng)基⑥中臨時(shí)斜面保藏．
（5）為進(jìn)一步鑒定菌種，需從菌株中提取少量的DNA分子通過PCR（填技術(shù)）擴(kuò)增并檢測(cè)．

Answer 1

分析 從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．膽固醇屬于脂質(zhì)，其主要元素組成為C、H、O．從土壤中篩選膽固醇轉(zhuǎn)化菌株需要使用以膽固醇為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基．

解答 解：（1）分解膽固醇的微生物屬于需氧型微生物，所以將土壤樣品接種到富集培養(yǎng)液①中培養(yǎng)時(shí)，需要將其置于搖床上不斷振蕩以增加溶解氧．
（2）據(jù)圖分析，培養(yǎng)液②③的作用是選擇培養(yǎng)，篩選膽固醇轉(zhuǎn)化菌株需要使用以膽固醇為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基．在相同的培養(yǎng)液②③中轉(zhuǎn)移培養(yǎng)主要是為了避免原培養(yǎng)液中碳源的干擾，又可以篩選純化獲得可轉(zhuǎn)化膽固醇的菌種．
（3）選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)液需要進(jìn)行梯度稀釋才能進(jìn)行涂布培養(yǎng)，涂布前需將涂布器在酒精燈火焰旁進(jìn)行灼燒滅菌并冷卻．
（4）篩選出目的菌株后，將菌種接種到培養(yǎng)基⑥中臨時(shí)斜面保藏．
（5）為進(jìn)一步鑒定菌種，需從菌株中提取少量的DNA分子通過PCR擴(kuò)增并檢測(cè)．
故答案為：
（1）增加溶解氧
（2）以膽固醇為唯一碳源   碳源   篩選純化獲得可轉(zhuǎn)化膽固醇的菌種
（3）梯度稀釋   灼燒并冷卻
（4）斜面
（5）PCR

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查微生物的篩選與分離、培養(yǎng)與保藏及PCR技術(shù)，意在強(qiáng)化學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)的識(shí)記、理解與運(yùn)用．