Question

19．圖a示基因工程中經(jīng)常選用的運(yùn)載體--pBR322質(zhì)粒，Amp^r表示氨芐青霉素抗性基因，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因．目的基因如果插入某抗性基因中，將使該基因失活，而不再具有相應(yīng)的抗性．為了檢查運(yùn)載體是否導(dǎo)入原本沒(méi)有Amp^r和Tet^r的大腸桿菌（受體細(xì)胞），將大腸桿菌涂布在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖b的結(jié)果（黑點(diǎn)表示菌落）．再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖c的結(jié)果（空圈表示與b對(duì)照無(wú)菌落的位置）．據(jù)此分析并回答：

（1）pBR322質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是DNA，質(zhì)粒的復(fù)制從質(zhì)粒上的復(fù)制原點(diǎn)開(kāi)始．
（2）根據(jù)用途，題中所用培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，與圖c空圈相對(duì)應(yīng)的圖b中的菌落表現(xiàn)型是抗氨青霉素，不抗四環(huán)素，由此說(shuō)明目的基因插入了Tet^r中．
（3）將質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，常用CaCl₂處理大腸桿菌，使之處于感受態(tài)，增大細(xì)胞壁的通透性．

Answer 1

分析 分析題圖：a表示質(zhì)粒，其本質(zhì)是雙鏈環(huán)狀DNA分子，其上含有標(biāo)記基因Amr^r、Tet^r；b培養(yǎng)基中含有氨芐青霉素，能在b上生存的是能抗氨芐青霉素的大腸桿菌，即含有Amr^r；c培養(yǎng)基中含有四環(huán)素，能在該培養(yǎng)基上生存的是能抗四環(huán)素的大腸桿菌，即含有Tet^r．

解答 解：（1）質(zhì)粒的本質(zhì)是雙鏈環(huán)狀DNA分子．質(zhì)粒的復(fù)制從質(zhì)粒上的復(fù)制原點(diǎn)開(kāi)始．
（2）圖中所用培養(yǎng)基的作用是篩選含有目的基因的大腸桿菌，屬于選擇培養(yǎng)基；圖b中的菌落能抗氨芐青霉素，圖c中的實(shí)心圈能抗氨芐青霉素和四環(huán)素，所以與圖c空圈相對(duì)應(yīng)的圖b中的菌落能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素，由此說(shuō)明目的基因插入了四環(huán)素抗性基因（Tet^r）中．
（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)細(xì)胞法，即常用CaCl₂處理大腸桿菌，增大了細(xì)胞壁的通透性，使之處于易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)．
故答案為：
（1）DNA   復(fù)制原點(diǎn)
（2）選擇培養(yǎng)基    抗氨青霉素，不抗四環(huán)素      Tet^r
（3）CaCl₂  感受   壁

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)和圖中信息準(zhǔn)確答題．