Question

20．下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程及有關(guān)資料，請分析回答下列問題．資料1  巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源，同時AOX1基因也會因受到誘導(dǎo)而表達(dá)．[5′AOX1和3′AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子]．
資料2  巴斯德畢赤酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，所以科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)．
（1）如果要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，需要用到DNA連接酶處理．
（2）獲取HBsAg基因時，可利用從基因文庫獲取、人工合成、方法獲�。�
（3）構(gòu)建的重組質(zhì)粒中有5′AOX1、3′AOX1（TT）和HBsAg基因外，還應(yīng)有標(biāo)記基因．
（4）步驟1中的方法是Ga²⁺處理，此時的大腸桿菌處于感受態(tài)（易吸收外界DNA分子的狀態(tài)）狀態(tài)．
（5）為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入卡拉霉素以便篩選，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞
中是否含有HBsAg基因，可以用DNA分子雜交方法進(jìn)行檢測．
（6）與大腸桿菌等細(xì)菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞作為基因工程的受體細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是在蛋白質(zhì)合
成后，細(xì)胞可以對其進(jìn)行加工（修飾）并分泌到細(xì)胞外，便于提�。�

Answer 1

分析 分析題圖：圖中質(zhì)粒含有SnaB、AvrⅡ、BglⅡ和SacI限制酶切割位點(diǎn)，其中SacI位于啟動子上，BglⅡ位于終止子上．要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，只能用限制酶SnaB和AvrⅡ切割質(zhì)粒，要獲取含有5′AOX1--3′AOX1段基因，應(yīng)選用限制酶BglⅡ來切割．5′AOX1--3′AOX1段基因含有卡那霉素抗性基因，在培養(yǎng)基中加入卡那霉素以便篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的目的菌．

解答 解：（1）獲取目的基因后，需要用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取大量重組質(zhì)粒．
（2）獲取目的基因時，可利用從基因文庫獲取、人工合成等方法獲�。�
（3）基因表達(dá)載體包括啟動子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因．
（4）在目的基因?qū)�入�?xì)菌細(xì)胞內(nèi)時，需要用Ga²⁺處理，此時的大腸桿菌處于感受態(tài)（易吸收外界DNA分子的狀態(tài)）狀態(tài)．
（5）轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞中是否含有HBsAg基因，可以用DNA分子雜交方法進(jìn)行檢測．
（6）細(xì)菌是原核生物，只含核糖體一種細(xì)胞器，而酵母菌是真核生物，除含有核糖體外，還含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器．所以與細(xì)菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞作為基因工程的受體細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是在蛋白質(zhì)合成后，細(xì)胞可以對其進(jìn)行加工（修飾）并分泌到細(xì)胞外，便于提�。�
故答案為：
（1）DNA連接酶
（2）從基因文庫獲取、人工合成
（3）標(biāo)記基因
（4）Ga²⁺處理    感受態(tài)（易吸收外界DNA分子的狀態(tài)）
（5）DNA分子雜交
（6）加工（修飾）

點(diǎn)評 本題結(jié)合工程菌形成過程，考查基因工程的相關(guān)知識，意在考查考生分析題圖獲取有效信息的能力；理解所學(xué)知識要點(diǎn)，把握知識間聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識解決生物學(xué)問題的能力和應(yīng)用能力．