Question

【題目】回答與枯草桿菌純化和a-淀粉酶固定化過程有關的問題：

（1）培養(yǎng)基的準備：在對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌的過程中，完成加水、裝鍋、加熱排氣、 保溫保壓適當時間后，切斷熱源，讓滅菌鍋內溫度自然下降，壓力表的讀數______________， 打開排氣閥，旋開固定螺栓，開蓋，才可以取出滅菌的培養(yǎng)基等物品。待培養(yǎng)基冷卻至______________左右時倒平板。

（2）枯草桿菌是生產a-淀粉酶的優(yōu)良菌種，為確定合適的稀釋倍數，小組成員取1mL菌原 液進行如圖1所示的操作，在無菌條件下，用______________取0． 1 mL稀釋后的菌懸液進行 圖2中____________所示的操作，接種后的平板在培養(yǎng)時的放置應如圖3______________（選填“a”或“b”）所示。在統(tǒng)計菌落時，發(fā)現平板上的平均菌落數為33個，則每毫升菌原液中的細菌數大約為______________個。

（3）a-淀粉酶宜采用吸附法進行固定化，下列關于反應柱的理解，正確的是______________

A．反應物和酶均可自由通過反應柱B．反應物和酶均不能通過反應柱

C．反應物能通過反應柱，酶不能通過反應柱D．反應物不能通過，酶能通過

（4）為了確定篩選出的a-淀粉酶的應用價值，還需要進一步檢測固相a-淀粉酶的活性，在該實驗中，親和層析洗脫液中加入KI-I2指示劑后，試管中呈現______________色。相對于唾液淀粉酶，枯草桿菌產生的a-淀粉酶具有______________特性，從而有利于工業(yè)生產。

Answer 1

【答案】降為零 60°C 移液槍（移液器） 甲 a 3．3×105個 C 紅色 耐高溫

【解析】

1、微生物常見的接種的方法

①平板劃線法：將已經熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經培養(yǎng)后可形成單個菌落。

2、固定化酶有物理法和化學法兩大類：物理方法包括物理吸附法、包埋法等，化學法包括交聯(lián)法等。缺點：不利于催化一系列的酶促反應；優(yōu)點：①既能與反應物接觸，又能與產物分離；②可以反復利用。

（1）培養(yǎng)基的準備：在對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌的過程中，完成加水、裝鍋、加熱排氣、保溫保壓適當時間后，切斷熱源，讓滅菌鍋內溫度自然下降，壓力表的壓力降為零，打開排氣閥，旋開固定螺栓，開蓋，才可以取出滅菌的培養(yǎng)基等物品。待培養(yǎng)基冷卻至60℃左右時倒平板。

（2）為確定合適的稀釋倍數，小組成員取1mL菌原 液進行如圖1所示的操作，在無菌條件下，用移液槍取0.1 mL稀釋后的菌懸液進行，因要對細菌進行計數，故選用稀釋涂布平板法進行接種，即圖2中甲所示的操作，接種后的平板在培養(yǎng)時的應該倒放，即如圖3中a所示。由圖1可知，菌原液被稀釋了103倍，在統(tǒng)計菌落時，發(fā)現平板上的平均菌落數為33個，則每毫升菌原液中的細菌數大約為33×10×103=3.3×105個。

（3）反應柱的底端分布著許多小孔的篩板，酶顆粒無法通過，反應溶液可以自由通過，故α-淀粉酶宜采用吸附法進行固定化時反應物能通過反應柱，酶不能通過反應柱，C正確。

故選C。

（4）酶柱中有α-淀粉酶，淀粉溶液經酶柱后的流出液，淀粉被水解成糊精，加人KI-I2溶液后呈紅色。與唾液淀粉酶相比，枯草桿菌產生的α-淀粉酶是適宜溫度在50~70℃，因此具有耐高溫的特點，有利于生產。