Question

9．蘇云金芽孢桿菌產(chǎn)生的Bt毒蛋白在害蟲的消化道內(nèi)能被降解成有毒的多肽，最終造成害蟲死亡，因此Bt基因廣泛用于培育轉(zhuǎn)基因抗蟲植物．
（1）培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉所需的目的基因來自蘇云金芽孢桿菌的基因組，再通過PCR技術(shù)擴(kuò)增．PCR反應(yīng)中溫度呈現(xiàn)周期性變化，其中加熱到90～95℃的目的是DNA解鏈（變性、解旋、受熱變性后解鏈為單鏈），然后冷卻到55-60℃使引物與互補(bǔ)DNA鏈結(jié)合，繼續(xù)加熱到70～75℃，目的是在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸（Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成）．
（2）限制酶主要是從原核生物（或微生物）中獲得，其特點(diǎn)是能夠識(shí)別DNA分子某種特定的核苷酸序列，并在特定位點(diǎn)切割DNA．
（3）科研人員培育某品種轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的過程中，發(fā)現(xiàn)植株并未表現(xiàn)抗蟲性狀．可能的原因是所轉(zhuǎn)的基因未成功導(dǎo)入，導(dǎo)入的基因未能準(zhǔn)確表達(dá)．
（4）在基因表達(dá)載體中，目的基因的首端和尾端必須含有啟動(dòng)子和終止子這樣目的基因才能準(zhǔn)確表達(dá)．

Answer 1

分析 1、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
2、PCR反應(yīng)過程是：變性→復(fù)性→延伸

過程	說明
變性	當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈
復(fù)性	溫度下降到50℃左右，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合
延伸	72℃左右時(shí)，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新鏈由5'端向3'端延伸

解答 解：（1）根據(jù)題意可知，培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉所需的目的基因來自蘇云金芽孢桿菌的基因組，再通過PCR技術(shù)擴(kuò)增．PCR反應(yīng)中溫度呈現(xiàn)周期性變化，其中加熱到90～95℃的目的是雙鏈DNA解聚為單鏈，然后冷卻到55-60℃使引物與互補(bǔ)DNA鏈結(jié)合，繼續(xù)加熱到70～75℃，目的是在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸．
（2）限制酶主要是從原核生物（或微生物）中獲得，其特點(diǎn)是能夠識(shí)別DNA分子某種特定的核苷酸序列，并在特定位點(diǎn)切割DNA．
（3）科研人員培育某品種轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的過程中，發(fā)現(xiàn)植株并未表現(xiàn)抗蟲性狀．可能的原因是所轉(zhuǎn)的基因未成功導(dǎo)入，導(dǎo)入的基因未能準(zhǔn)確表達(dá)．
（4）在基因表達(dá)載體中，目的基因的首端和尾端必須含有啟動(dòng)子和終止子，這樣目的基因才能準(zhǔn)確表達(dá)，其中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，終止子終止基因的轉(zhuǎn)錄．
故答案為：
（1）蘇云金芽孢桿菌DNA解鏈（變性、解旋、受熱變性后解鏈為單鏈）  在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸（Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成）
（2）原核生物（或微生物）    特定的核苷酸序列
（3）所轉(zhuǎn)的基因未成功導(dǎo)入，導(dǎo)入的基因未能準(zhǔn)確表達(dá)
（4）啟動(dòng)子和終止子

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程和PCR技術(shù)等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟及應(yīng)用，掌握各操作步驟中的方法及相關(guān)事項(xiàng)；識(shí)記PCR技術(shù)的概念、原理及條件，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)答題，屬于考綱識(shí)記層次的考查．