Question

【題目】已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，某制藥廠根據(jù)如圖所示的流程圖生產(chǎn)預(yù)防和治療該傳染病的單克隆抗體，請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問(wèn)題：

（1）單克隆抗體的特性有_______________，其制備過(guò)程運(yùn)用了_________和_______________的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)。

（2）上圖中常用的化學(xué)促融劑是____________，假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成____________種類型的融合細(xì)胞，因此需要特定的HAT培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞用于培養(yǎng)。已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷，淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖，骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒(méi)有S途徑，能無(wú)限分裂增殖，則HAT培養(yǎng)基中應(yīng)添加____________才具有篩選雜交瘤細(xì)胞的作用。

（3）經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體篩選后獲得的雜交瘤細(xì)胞具有的特點(diǎn)是_______________________。

（4）在大規(guī)模培養(yǎng)過(guò)程中，為保證細(xì)胞處于無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境，除了對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行滅菌、添加一定量的抗生素外，還要_________________，以防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成傷害。

Answer 1

【答案】特異性強(qiáng)，靈敏度高，能大量制備 動(dòng)物細(xì)胞融合 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 聚乙二醇（PEG） 三 氨基嘌呤 既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生所需的專一抗體 定期更換培養(yǎng)液

【解析】

單克隆抗體的制備過(guò)程：

1.免疫動(dòng)物：用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞。

2.細(xì)胞融合：將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞。

3.選擇性培養(yǎng)：選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（S途徑），不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（S途徑），但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從淋巴細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（S途徑），并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。

4.雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化：在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞，只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞，因此，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。

5.單克隆抗體的大量制備：主要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。

(1)體內(nèi)誘生法：在小鼠腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見(jiàn)小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。

(2)體外培養(yǎng)法：將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中，雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體，收集培養(yǎng)上清液，離心去除細(xì)胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。

（1）單克隆抗體具備特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備的特點(diǎn)，在制備過(guò)程中需應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞融合和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)完成制備。

（2）動(dòng)物細(xì)胞融合所應(yīng)用促融劑為聚乙二醇，也可利用離心、振動(dòng)、電激或滅活的病毒處理細(xì)胞，加速融合。融合后的細(xì)胞有三種：雜交瘤細(xì)胞、骨髓瘤-骨髓瘤細(xì)胞、淋巴-淋巴細(xì)胞。要篩選出雜交瘤細(xì)胞，需阻斷骨髓瘤細(xì)胞能夠進(jìn)行的D途徑，即在培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤，阻止其增殖。

（3）雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能無(wú)限增值，又可以產(chǎn)生所需的專一抗體。

（4）想要保證細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的環(huán)境安全，不僅要加入適量抗生素抑制外來(lái)細(xì)菌，也需要定期更換培養(yǎng)液防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物的積累對(duì)細(xì)胞造成傷害。