【題目】癌細(xì)胞表面蛋白“PDL﹣1”與T細(xì)胞表面蛋白“PD﹣1”特異性結(jié)合后,可抑制T細(xì)胞活性并啟動(dòng)其凋亡,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫“逃逸”。研究者對(duì)“PD﹣1”基因進(jìn)行克隆、表達(dá)及生物學(xué)活性鑒定,為制備抗體打基礎(chǔ)。研究中所用引物α和β堿基序列見(jiàn)圖1、幾種常用限制酶名稱及識(shí)別序列與酶切位點(diǎn)見(jiàn)圖2:
(1)首先提取細(xì)胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄生成_____作為模板:設(shè)計(jì)含有不同的限制酶切點(diǎn)的α和β序列為引物,通過(guò)_____技術(shù)擴(kuò)增目的基因。
(2)選用圖1中的兩種名稱分別為_____的限制酶將“pIRES2﹣EGFP質(zhì)!陛d體進(jìn)行雙切,再用DNA連接酶將其與目的基因拼接,構(gòu)建表達(dá)載體。該表達(dá)載體的組成,除了目的基因、標(biāo)記基因抗卡那霉素基因外,還必須具有_____等
(3)而后一定溫度下,與經(jīng)過(guò)Ca2+處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有_____培養(yǎng)基中,可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的大腸桿菌,繼續(xù)培養(yǎng)該種大腸桿菌以擴(kuò)增重組DNA。
(4)將擴(kuò)增后的“pIRES2﹣EGFP載體/PD﹣1重組DNA”轉(zhuǎn)入可高度表達(dá)外源基因的原代293T細(xì)胞。一段時(shí)間后,為確定PD﹣1基因是否表達(dá),檢測(cè)細(xì)胞膜表面是否具有_____。為判斷其是否具有生物學(xué)活性和功能,則可裂解293T細(xì)胞,提取該物質(zhì)看能否與_____發(fā)生結(jié)合,從而阻斷“PD﹣1與PDL﹣1信號(hào)通路”。研究中還會(huì)有一步驟,只將“pIRES2﹣EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞,其目的是_____。
【答案】cDNA PCR XhoI、EoRI 啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn) 卡那霉素 PD﹣1蛋白 PDL﹣1或答ⅣD﹣1抗體 作為對(duì)照
【解析】
基因工程技術(shù)的基本步驟:
(1)目的基因的獲。悍椒ㄓ袕幕蛭膸(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建:是基因工程的核心步驟,基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞:根據(jù)受體細(xì)胞不同,導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法;將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定:分子水平上的檢測(cè):①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因DNA分子雜交技術(shù);②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA分子雜交技術(shù);③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定:抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
(1)以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄形成cDNA;擴(kuò)增目的基因可采用PCR技術(shù)。
(2)根據(jù)圖1中堿基序列和圖2中四種限制酶的識(shí)別序列可知,選用圖1中的兩種名稱分別為XhoI、EoRI的限制酶將“pIRES2EGFP質(zhì)粒”載體進(jìn)行雙切,再用DNA連接酶將其與目的基因拼接,構(gòu)建表達(dá)載體;虮磉_(dá)載體的組成包括目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)等。
(3)根據(jù)第(2)題可知,標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因,因此培養(yǎng)基中需要加入卡那霉素。
(4)將擴(kuò)增后的“pIRES2EGFP載體/PD1重組DNA”轉(zhuǎn)入可高度表達(dá)外源基因的原代293T細(xì)胞。一段時(shí)間后,為確定PD1基因是否表達(dá),檢測(cè)細(xì)胞膜表面是否具有PD1蛋白。為判斷其是否具有生物學(xué)活性和功能,則可裂解293T細(xì)胞,提取該物質(zhì)看能否與PDL1發(fā)生結(jié)合,從而阻斷“PD1與PDL1信號(hào)通路”。研究中還會(huì)有一步驟,只將“pIRES2EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞,其目的是作為對(duì)照。
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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:
【題目】圖表示甲、乙、丙三種細(xì)胞生活的液體環(huán)境,分別用A、B、C表示。下列敘述錯(cuò)誤的是( )
A.B中含有氣體,乙細(xì)胞不一定消耗和產(chǎn)生氣體
B.C中的血漿蛋白含量減少會(huì)導(dǎo)致B中液體的量增多
C.A、B、C的滲透壓和酸堿度都與其中的某些離子有關(guān)
D.A、B、C是甲、乙、丙細(xì)胞與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的媒介
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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:
【題目】如圖a、b、c、d表示某生態(tài)系統(tǒng)的四種成分箭頭表示各成分之間的關(guān)系,下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是
A.箭頭可表示各成分之間的信息傳遞
B.b中CO2含量增加將會(huì)加劇溫室效應(yīng)
C.c1的同化量越大流向c2的能量就越多
D.生物圈的物質(zhì)是自給自足的能量是需要不斷補(bǔ)充的
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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:
【題目】薇甘菊是一種繁殖力很強(qiáng)的惡性入侵多年生草本植物,當(dāng)其入侵某生態(tài)系統(tǒng)后,科研人員研究發(fā)現(xiàn),隨著薇甘菊入侵程度加強(qiáng),昆蟲(chóng)種類數(shù)及碳儲(chǔ)量變化如下表。
群落類型 | 未入侵 | 輕度入侵 | 重度入侵 | |
昆蟲(chóng)(種) | 110 | 75 | 55 | |
碳儲(chǔ)量 (噸/公頃) | 植被 | 60.2 | 48.6 | 35.7 |
凋落物 | 2.1 | 3.8 | 4.8 | |
土壤 | 180.9 | 151.0 | 122.8 |
(1)分析上表可知薇甘菊入侵對(duì)昆蟲(chóng)造成的影響是______________________,從種間關(guān)系的角度分析,造成這種現(xiàn)象可能的原因是________________________________。
(2)隨薇甘菊入侵程度的加強(qiáng),土壤中分解者的分解作用逐漸_________________,依據(jù)是____________________________。
(3)若要控制薇甘菊的入侵程度進(jìn)一步加大,請(qǐng)?zhí)岢鰞蓷l具體措施以實(shí)現(xiàn)生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)效益的雙贏:_______________________________________。
(4)科研人員同時(shí)對(duì)另一入侵植物互花米草進(jìn)行了調(diào)查,互花米草在潮間帶具有超強(qiáng)的繁殖和擴(kuò)散力,圖示為互花米草灘涂和自然灘涂中底棲動(dòng)物種類的調(diào)查結(jié)果。
①研究表明,在兩種灘涂中隨泥層深度的增加底棲動(dòng)物種類數(shù)_________,影響底棲動(dòng)物在泥層中分布的主要因素是______________________。
②某同學(xué)根據(jù)本調(diào)查得到“引種互花米草對(duì)灘涂表面底棲動(dòng)物的分布沒(méi)有影響”的結(jié)論,請(qǐng)對(duì)這一結(jié)論作出評(píng)價(jià),并說(shuō)明理由。__________________________________。
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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:
【題目】將甲乙兩種植物分別置于密閉透明的玻璃罩內(nèi),在相同且適宜的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn),測(cè)定玻璃罩內(nèi)CO2的含量,結(jié)果如下。下列說(shuō)法正確的是
A.0 ~ 25min期間,甲乙植物的光合作用逐漸增強(qiáng)
B.30 ~ 45min期間,甲乙植物均停止光合作用
C.0 ~ 45min期間,甲乙植物體內(nèi)有機(jī)物的量逐漸減少
D.乙植物光合作用固定CO2的能力比甲植物的強(qiáng)
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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:
【題目】為了研究根背光生長(zhǎng)與生長(zhǎng)素之間的關(guān)系,某生物興趣小組的同學(xué)將水稻幼苗分別培養(yǎng)在含不同濃度生長(zhǎng)素或適宜濃度NPA(生長(zhǎng)素運(yùn)輸抑制劑)的溶液中,用水平單側(cè)光照射其根部(如圖甲),測(cè)得根的彎曲角度及生長(zhǎng)速率如表:
處理方式 測(cè)定指標(biāo) | 外源生長(zhǎng)素(mg/L) | NPA(mol/L) | |||
0 | 0.001 | 0.01 | 0.1 | 3 | |
彎曲角度α(度) | 37 | 40 | 31 | 22 | 16 |
生長(zhǎng)速率(mm/天) | 15 | 17 | 13 | 11 | 8 |
(1)從圖甲的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),根向光一側(cè)的生長(zhǎng)速率比背光側(cè)___,可對(duì)根進(jìn)行____(填“縱”或“橫”)切片,在顯微鏡下觀察到這一結(jié)果。
(2)在研究根背光生長(zhǎng)與生長(zhǎng)素的關(guān)系的實(shí)驗(yàn)中,因變量是___________________。
(3)從表中的數(shù)據(jù)可以分析出:生長(zhǎng)素對(duì)水稻根生長(zhǎng)的作用具有________性,如果要進(jìn)一步研究彎曲度最大的外源生長(zhǎng)濃度,選擇的濃度范圍___________mg/L。
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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:
【題目】研究發(fā)現(xiàn),在線粒體內(nèi)膜兩側(cè)存在H+濃度差。H+順濃度梯度經(jīng)ATP合成酶轉(zhuǎn)移至線粒體基質(zhì)的同時(shí),驅(qū)動(dòng)ATP的合成(如下圖)。
根據(jù)圖示得出的下列結(jié)論中,錯(cuò)誤的是( )
A.ATP合成酶中存在跨膜的H+通道
B.H+可直接穿過(guò)內(nèi)膜磷脂雙分子層
C.此過(guò)程發(fā)生在有氧呼吸第三階段
D.線粒體的內(nèi)、外膜功能存在差異
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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:
【題目】下圖1所示,探究性實(shí)驗(yàn)裝置共六個(gè),六個(gè)裝置中分別加入飽和葡萄糖溶液及兩粒凝膠珠,實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí),小液滴都在C點(diǎn)(刻度管足夠長(zhǎng),瓶?jī)?nèi)氧氣充足)。六個(gè)裝置分別在0℃、15℃、25℃、35℃、45℃、55℃溫度下,每隔2 min后,記錄各個(gè)裝置中小液滴的位置,并且描繪出實(shí)驗(yàn)開(kāi)始10 min后的坐標(biāo)曲線圖如圖2。
(1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖?/span>_________________________,自變量是_______。
(2)錐形瓶中NaOH溶液的作用是_____________,實(shí)驗(yàn)中小液滴移動(dòng)的方向是_______,理由是_______________。移動(dòng)的距離表示____________。
(3)如果在制備固定化醋酸菌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中,海藻酸鈉的濃度過(guò)低,請(qǐng)?jiān)趫D2坐標(biāo)系中畫(huà)出實(shí)驗(yàn)開(kāi)始10 min后的曲線乙____________。
(4)工業(yè)生產(chǎn)中利用固定化細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行生產(chǎn), 從哪些方面可以達(dá)到延長(zhǎng)利用固定化細(xì)胞時(shí)間的目的? __________________________________。
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科目:高中生物 來(lái)源: 題型:
【題目】某紅酒生產(chǎn)工藝流程簡(jiǎn)圖如下,請(qǐng)據(jù)圖回答下面的問(wèn)題。
(1)流程中“方框”處的內(nèi)容依次為____、____。
(2)果酒釀造過(guò)程中如果果汁滅菌不合格,含有醋酸菌,在酒精發(fā)酵旺盛時(shí),醋酸菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸?說(shuō)明理由_____________________________。
(3)果酒制作離不開(kāi)酵母菌,與醋酸菌相比,酵母菌在結(jié)構(gòu)上的主要特點(diǎn)是________。
(4)葡萄酒制作過(guò)程中,接種完成后要先向發(fā)酵罐中通入一段時(shí)間的無(wú)菌空氣,目的是_____________________________________。
(5)若要提高果酒的產(chǎn)量,發(fā)酵過(guò)程中關(guān)鍵要控制好哪些條件?________。(至少填寫(xiě)2項(xiàng))
(6)果酒制作是否成功,需發(fā)酵后用____來(lái)鑒定,在酸性條件下,該物質(zhì)與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)____色。
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