Question

馬里奧?卡佩基等科學(xué)家在胚胎干細(xì)胞和哺乳動(dòng)物DNA重組方面的研究中取得一系列突破性發(fā)現(xiàn)，這些發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致了“基因敲除”技術(shù)（通常叫基因打靶）的出現(xiàn)，利用這一技術(shù)可以準(zhǔn)確地“敲除”DNA分子上的特定基因，該技術(shù)的過(guò)程大致如下：
第一步：分離胚胎干細(xì)胞．從小鼠囊胚中分離出胚胎干細(xì)胞，在培養(yǎng)基中擴(kuò)增．這些細(xì)胞中需要改造的基因稱為“靶基因”．
第二步：突變DNA的體外構(gòu)建．利用基因工程技術(shù)在含靶基因的DNA片段上插入neo^R基因（新霉素抗性基因），使該片段上的靶基因失活．
第三步：突變DNA與靶基因互換．將體外構(gòu)建的突變DNA轉(zhuǎn)移入胚胎干細(xì)胞，再通過(guò)同源互換，用失活靶基因取代兩個(gè)正常靶基因中的一個(gè)，完成對(duì)胚胎干細(xì)胞的基因改造．
第四步：將第三步處理后的胚胎干細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到特定培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng)．
其基本原理如圖所示：

請(qǐng)根據(jù)上述資料，回答下列問(wèn)題：
（1）第一步從小鼠囊胚的

 

部位，獲得胚胎干細(xì)胞．
（2）第二步若將靶基因只用一種限制酶敲除，則該DNA片斷中應(yīng)用

 

個(gè)酶切位點(diǎn)，再用DNA連接酶將敲除后的若干DNA片斷進(jìn)行連接，得到的重組DNA有

 

種類型．若用一種限制酶將靶基因敲除后，再插入neo^R基因，則體外構(gòu)建的突變DNA有

 

種類型．
（3）第四步的特定培養(yǎng)基中必須加入物質(zhì)

 

，該培養(yǎng)基為

 

培養(yǎng)基．
（4）研究者成功獲得如上圖所示的“敲除”一個(gè)靶基因的胚胎干細(xì)胞，若將該細(xì)胞培育成基因敲除小鼠，運(yùn)用到的生物技術(shù)有

 

、

 

．
（5）科學(xué)家可以通過(guò)敲除基因來(lái)研究基因的功能，第（4）題中獲得的基因敲除小鼠，能否直接用來(lái)研究基因的功能？

 

；為什么？

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：胚胎工程的概念及操作對(duì)象,胚胎移植,胚胎干細(xì)胞的來(lái)源及分化

專題：

分析：囊胚包括內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層，其中內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞，具有發(fā)育的全能性，屬于胚胎干細(xì)胞．若將靶基因只用一種限制酶敲除，則靶基因兩側(cè)應(yīng)各有一個(gè)酶切位點(diǎn)．用用1表示靶基因前的基因、2表示靶基因、3表示靶基因后的基因，用DNA連接酶將敲除后的若干DNA片斷進(jìn)行連接時(shí)，可得到3種類型的重組DNA，即1和2連接形成的重組DNA、2和3連接形成的重組DNA、1和3連接形成的重組DNA．若用一種限制酶將靶基因敲除后，再插入neo^R基因，由于只有重組DNA1和2、重組DNA2和3中含有靶基因，所以體外構(gòu)建的突變DNA有2種類型．

解答： 解：（1）囊胚包括內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層，其中內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞，具有發(fā)育的全能性，屬于胚胎干細(xì)胞．
（2）若將靶基因只用一種限制酶敲除，則靶基因兩側(cè)應(yīng)各有一個(gè)酶切位點(diǎn)．用用1表示靶基因前的基因、2表示靶基因、3表示靶基因后的基因，用DNA連接酶將敲除后的若干DNA片斷進(jìn)行連接時(shí)，可得到3種類型的重組DNA，即1和2連接形成的重組DNA、2和3連接形成的重組DNA、1和3連接形成的重組DNA．若用一種限制酶將靶基因敲除后，再插入neo^R基因，由于只有重組DNA1和2、重組DNA2和3中含有靶基因，所以體外構(gòu)建的突變DNA有2種類型．
（3）第四步的特定培養(yǎng)基中必須加入物質(zhì)新霉素，該培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，用以選擇成功“敲除”一個(gè)靶基因的胚胎干細(xì)胞．
（4）將“敲除”一個(gè)靶基因的胚胎干細(xì)胞培育成基因敲除小鼠，需要運(yùn)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)．
（5）因?yàn)樵摶�因敲除小鼠只敲除了一個(gè)基因，還有一個(gè)基因會(huì)行使功能，因此無(wú)法判斷此基因的功能，所以不能用獲得的基因敲除小鼠來(lái)直接研究基因的功能．
故答案為：
（1）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)　
（2）2　3　2　
（3）新霉素　選擇　
（4）胚胎移植　動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
（5）不能　該基因敲除小鼠只敲除了一個(gè)基因，還有一個(gè)基因會(huì)行使功能，因此無(wú)法判斷此基因的功能

點(diǎn)評(píng)：本題以基因敲除技術(shù)為背景，考查基因工程、胚胎工程等相關(guān)知識(shí)，意在考查考生分析題文提取信息的能力；能理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)和觀點(diǎn)，通過(guò)比較、分析與綜合等方法對(duì)某些生物學(xué)問(wèn)題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論．