Question

【題目】下圖1是利用兩種不同生物技術(shù)將小鼠培育成大鼠的過程。圖2中質(zhì)粒是基因工程中常用的質(zhì)粒pIJ702，其中tsr為硫鏈絲菌素抗性基因，mel是黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而限制酶ClaⅠ、BglⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分別只有一處識(shí)別序列。

（1）圖1中應(yīng)用到的生物工程技術(shù)有______________。

A.核移植技術(shù) B.轉(zhuǎn)基因技術(shù)

C.胚胎移植 D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

（2）若大鼠甲和大鼠乙體內(nèi)X染色體上均帶有某種致病基因，則培育出的大鼠丙和大鼠丁攜帶致病基因的是________（不考慮基因突變）。

（3）c分子稱為____________。構(gòu)建c時(shí)，應(yīng)選用限制酶和________，影響酶處理效果的因素可能有________

A. 反應(yīng)溫度　B. 緩沖液pH　C. 酶的純度　D. 氧氣濃度

（4）以SacⅠ和SphⅠ同時(shí)切割大鼠生長(zhǎng)激素基因和質(zhì)粒pIJ702，獲取的目的基因去置換pIJ702上0.4 kb的片段，構(gòu)成質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒的限制酶酶切片段長(zhǎng)度列在表1中。由此判斷目的基因的片段長(zhǎng)度為__________kb。參照表1數(shù)據(jù)，如果用PstⅠ和ClaⅠ同時(shí)酶切質(zhì)粒pZHZ8，則兩種酶可將pZHZ8切成__________個(gè)片段。

（5）質(zhì)粒pZHZ8上的標(biāo)記基因是____________，在含硫鏈絲菌素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，篩選過程中要淘汰________色的菌落。

Answer 1

【答案】ABCD 大鼠丙 重組質(zhì)粒 DNA連接酶 ABC 1.4 4 tsr基因（或硫鏈絲菌素抗性基因） 黑

【解析】

分析圖1：圖1是利用兩種不同生物技術(shù)將小鼠培育成大鼠的過程。Ⅰ采用了核移植技術(shù)；Ⅱ采用了基因工程技術(shù)，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，然后導(dǎo)入小鼠受精卵。

（1）圖1中，技術(shù)Ⅰ采用了核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)，技術(shù)Ⅱ采用了基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)，因此圖1中應(yīng)用到的生物工程技術(shù)有核移植技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、胚胎移植技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等，ABCD正確。故選ABCD。
（2）大鼠丙的細(xì)胞核遺傳物質(zhì)都來自大鼠甲，因此且攜帶致病基因；大鼠丁只導(dǎo)入了大鼠乙的一個(gè)基因，因此不攜帶致病基因。

（3）c是構(gòu)建好的基因表達(dá)載體（重組DNA分子或重組質(zhì)粒）；應(yīng)選用限制酶和DNA連接酶，影響酶的因素都會(huì)影響限制酶的處理效果，所以影響限制酶處理效果的因素可能有溫度、pH、酶純度等，即ABC。

（4）質(zhì)粒PIJ702的長(zhǎng)度為5.7kb，而重組質(zhì)粒pZHZ8的長(zhǎng)度為6.7kb，又已知構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，目的基因置換了PIJ702上0.4kb的片段，由此判斷目的基因的片段長(zhǎng)度為6.7-5.7+0.4=1.4kb．用ClaⅠ切割質(zhì)粒PIJ702時(shí)只產(chǎn)生一種長(zhǎng)度的DNA片段，但用該酶切割重組質(zhì)粒pZHZ8時(shí)能產(chǎn)生兩種長(zhǎng)度的DNA片段，這說明目的基因中含有ClaⅠ的切割位點(diǎn)，同理目的基因中也含有PstⅠ的切割位點(diǎn)，即重組質(zhì)粒pZHZ8中含有2個(gè)PstⅠ酶切位點(diǎn)，也含有2個(gè)Cla l酶切位點(diǎn)。因此，用這兩種酶同時(shí)酶切重組質(zhì)粒pZHZ8時(shí)，可將pZHZ8切成4個(gè)片段。
（5）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，破壞了mel（黑色素合成基因），但沒有破壞tsr（硫鏈絲菌素抗性基因），因此重組質(zhì)粒pZHZ8上的標(biāo)記基因是tsr基因（硫鏈絲菌素抗性基因）；由于mel（黑色素合成基因）被破壞，含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞不能表達(dá)產(chǎn)生黑色素，因此重組質(zhì)粒中的在含硫鏈絲菌素固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，篩選過程中要淘汰黑色的菌落。