Question

10．水污染是全球性的環(huán)境問(wèn)題，微生物降解是水污染治理的有效手段之一．聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一種難以降解的大分子有機(jī)物，PVA分解菌能產(chǎn)生PVA酶分解PVA，PVA與碘作用時(shí)能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)PVA被分解時(shí)藍(lán)綠色復(fù)合物消失，形成白色透明斑，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）要從土壤中篩選出能高效分解PVA的細(xì)菌，應(yīng)采用以聚乙烯醇（或PVA）作為唯一的碳源的選擇培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)中還應(yīng)設(shè)置對(duì)照組．將菌液稀釋相同的倍數(shù)，對(duì)照組培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于（多于/少于）選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，從而說(shuō)明選擇培養(yǎng)基具有篩選作用．
（2）要測(cè)定土壤稀釋液中微生物的數(shù)目，可在顯微鏡下用血細(xì)胞（血球）計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)．若將100ml含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋10⁴倍后，取0.1ml稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測(cè)得菌落數(shù)的平均值為160個(gè)，空白對(duì)照組平板上未出現(xiàn)菌落，則100ml原菌液中有PVA分解菌1.6×10⁹個(gè)，該方法的測(cè)量值與實(shí)際值相比一般會(huì)偏�。ㄆ�大/偏小/相等）．
（3）要鑒定分離出的細(xì)菌是否為PVA分解菌，培養(yǎng)PVA分解菌的培養(yǎng)基中除了加入必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還需要加入碘用于鑒別PVA分解菌．要比較不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA濃度的上述培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)不同菌株，一定時(shí)間后，通過(guò)測(cè)定白色透明斑的大小（或直徑）來(lái)確定不同菌株降解PVA能力的大�。�
（4）提取橘皮精油，常采用壓榨法而不用水蒸汽蒸餾法，原因是橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解，又會(huì)產(chǎn)生原料焦糊等問(wèn)題．

Answer 1

分析 1、選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌，從而提高該菌的篩選率．
2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)； ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）
 ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌．通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性．
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．
③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．

解答 解：（1）分析題意可知，要從土壤中篩選出能高效分解PVA的細(xì)菌，應(yīng)采用以聚乙烯醇（或PVA）作為唯一的碳源的選擇培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)中還應(yīng)設(shè)置對(duì)照組．將菌液稀釋相同的倍數(shù)，對(duì)照組培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，從而說(shuō)明選擇培養(yǎng)基具有篩選作用．
（2）要測(cè)定土壤稀釋液中微生物的數(shù)目，可在顯微鏡下用血細(xì)胞（血球）計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)．若將100ml含有PVA分解菌的土壤樣品溶液稀釋10⁴倍后，取0.1ml稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測(cè)得菌落數(shù)的平均值為160個(gè)，空白對(duì)照組平板上未出現(xiàn)菌落，則100ml原菌液中有PVA分解菌=160÷0.1×10⁴×100=1.6×10⁹個(gè)．由于兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)菌在一起時(shí)只能長(zhǎng)成一個(gè)菌落，因此該方法的測(cè)量值與實(shí)際值相比一般會(huì)偏�。�
（3）根據(jù)題意可知“PVA分解菌能產(chǎn)生PVA酶分解PVA，PVA與碘作用時(shí)能產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，當(dāng)PVA被分解時(shí)藍(lán)綠色復(fù)合物消失，形成白色透明斑”，因此要比較不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA濃度的上述培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)不同菌株，一定時(shí)間后，通過(guò)測(cè)定白色透明斑的大�。ɑ蛑睆剑﹣�(lái)確定不同菌株降解PVA能力的大�。�
（4）提取橘皮精油時(shí)，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解，又會(huì)產(chǎn)生原料焦糊等問(wèn)題，因此常采用壓榨法而不用水蒸汽蒸餾法．
故答案為：
（1）聚乙烯醇（或PVA）     多于
（2）血細(xì)胞（血球）    1.6×10⁹       偏小
（3）白色透明斑的大�。ɑ蛑睆剑�
（4）壓榨法   　橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時(shí)會(huì)發(fā)生部分水解，又會(huì)產(chǎn)生原料焦糊等問(wèn)題

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求掌握選擇培養(yǎng)基應(yīng)用，能夠根據(jù)題干信息確定培養(yǎng)基成分，掌握微生物分離與計(jì)數(shù)的方法．