Question

【題目】為了解基因結(jié)構(gòu)，通常選取一特定長(zhǎng)度的線(xiàn)性DNA分子，先用一種限制酶切割，通過(guò)電泳技術(shù)將單酶水解片段分離，計(jì)算相對(duì)大��；然后再用另一種酶對(duì)單酶水解片段進(jìn)行降解，分析片段大小。下表是某小組進(jìn)行的相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

已知第一線(xiàn)性DNA序列共有 5000bp （bp為堿基對(duì)）	第一步水解	產(chǎn)物 （單位bp）	第二步水解	產(chǎn)物 （單位bp）
	A酶切割	3500	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用B酶切割	1500 2000
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2000	將第一步水解產(chǎn)物分離后，分別用A酶切割	500 1500
		3000		2000 1000
	經(jīng)A酶和B酶同時(shí)切割	2000 1500 1000 500

（1）該實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)出限制酶的作用特點(diǎn)是 。

（2）由實(shí)驗(yàn)可知，在這段已知序列上，A酶與B酶的識(shí)別序列分別為 個(gè)和 個(gè)。

（3）根據(jù)表中數(shù)據(jù)，請(qǐng)?jiān)谙聢D中用箭頭標(biāo)出相應(yīng)限制酶的酶切位點(diǎn)。

（4）已知BamH I與BglⅡ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下圖所示，用這兩種酶和DNA連接酶對(duì)一段含有數(shù)個(gè)BamHI和BglⅡ識(shí)別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干次循環(huán)后和 序列明顯增多，該過(guò)程中DNA連接酶催化 鍵的形成。

Answer 1

【答案】

（1）一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，且在特定的位點(diǎn)切割

（2）2 1

（3）

（4） 磷酸二酯鍵

【解析】

（1）該實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)出限制酶的作用特點(diǎn)是酶的專(zhuān)一性．

（2）A酶切割后形成3段，所以有2個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，B酶切割后形成2段，所以有1個(gè)切割位點(diǎn)．

（3）由于酶B只有一個(gè)限制酶切位點(diǎn)，即在2000和3000之間，可以先標(biāo)注出；又由于酶A又可以將2000的這段切成500和1500的，結(jié)合酶A單獨(dú)切割又可以標(biāo)注其切割位點(diǎn)，同理標(biāo)出另一個(gè)切割位點(diǎn)，答案如下圖：

（4）巳知BamHI與BglII的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如圖2所示。用這兩種酶和DNA連接酶對(duì)一段含有數(shù)個(gè)BamHⅠ和BglⅡ識(shí)別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干循環(huán)后和序列明顯增多。DNA連接酶催化形成的是磷酸二酯鍵。