Question

10．白細胞介素是一類淋巴因子．研究人員將人白細胞介素的基因導入到酵母細胞中，使其分泌出有活性的白細胞介素．
（1）在體液免疫過程中，白細胞介素是由T淋巴細胞分泌的，可作用于受到抗原刺激的B細胞，使B細胞增殖，分化、形成漿細胞和記憶細胞．
（2）從健康人體外周靜脈血分離得到淋巴細胞，于37°培養(yǎng)48h，提取細胞總RNA，生成cDNA．根據已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通過PCR擴增獲取目的基因，此時需要加入物質與生成cDNA時所加物質不同的是模板cDNA、引物、耐高溫（熱穩(wěn)定）DNA聚合酶（Taq酶）．
（3）用兩種限制酶EcoR1與EcoR52處理載體和目的基因后，用DNA連接酶處理，形成重組載體．該載體與細胞膜上載體的化學本質分別是DNA和蛋白質．
（4）將重組載體導入酵母細胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，收集菌液離心取上清液（上清液/菌體）進行產物鑒定．若要統(tǒng)計培養(yǎng)液中酵母菌的活菌數目，常用的方法是稀釋涂布平板法．
（5）利用純化的產物進行細胞培養(yǎng)實驗，可研究人白細胞介素對于促進淋巴細胞增殖（抑制腫瘤細胞增殖）的作用．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示基因表達載體的構建過程，載體和目的基因都有限制酶EcoRⅠ與EcoR52的切割位點，所以切割載體和目的基因時用限制酶EcoRⅠ與EcoR52，再用DNA連接酶連接目的基因和運載體形成重組載體．

解答 解：（1）白細胞介素是一種淋巴因子，在體液免疫過程中，是由T細胞分泌的；B細胞能增殖、分化形成漿細胞和記憶細胞．
（2）以RNA為模板合成cDNA稱為逆轉錄（反轉錄），該過程需要模板（RNA）、酶（逆轉錄酶和DNA聚合酶）、原料（脫氧核苷酸）和能量．采用PCR技術擴增獲取目的基因時需要模板（cDNA）、酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、原料（脫氧核苷酸）、引物．因此，根據已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通過PCR擴增獲取目的基因，此時需要加入的反應物與生成cDNA時所加反應物不同的是：模板cDNA、耐高溫（熱穩(wěn)定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物．
（3）構建基因表達載體時，需先用兩種限制酶EcoR1與EcoR52處理載體和目的基因后，再用DNA連接酶處理，形成重組載體．該載體的化學本質是DNA，而細胞膜上載體的化學本質是蛋白質．
（4）將導入重組載體的酵母細胞培養(yǎng)一段時間后，收集菌液進行離心，應取上清液進行產物鑒定（白細胞介素屬于分泌蛋白）．若要統(tǒng)計培養(yǎng)液中酵母菌的數目可采用抽樣檢測法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法統(tǒng)計的是活菌數目．
（5）白細胞介素可治療癌癥，因此可推知白細胞介素可抑制腫瘤細胞的增殖．因此利用純化的產物進行細胞培養(yǎng)實驗，可研究人白細胞介素抑制腫瘤細胞增殖的作用．
故答案為：
（1）漿細胞和記憶
（2）耐高溫（熱穩(wěn)定）DNA聚合酶（Taq酶）
（3）DNA連接    DNA 和蛋白質
（4）上清液    稀釋涂布平板法
（5）促進淋巴細胞增殖（抑制腫瘤細胞增殖）

點評 本題結合圖解，綜合考查免疫、基因工程、PCR技術、微生物的培養(yǎng)和分離等知識，要求考生識記人體免疫細胞的組成及特異性免疫過程；識記基因工程的工具及操作步驟；掌握純合微生物的方法，能運用所學的知識答題．