Question

13．人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得．流程如下：

（1）htPA基因與載體用同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）切割后，通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體．
（2）為獲取更多的卵（母）細(xì)胞，要對供體．母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．采集的精子需要經(jīng)過獲能，才具備受精能力．
（3）將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用．的方法是顯微注射法．為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定．利用胚胎移植和胚胎分割技術(shù)可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的全能性．
（4）若在轉(zhuǎn)ht-PA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達(dá)．

Answer 1

分析 DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
該基因工程需要對羊的性別進(jìn)行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進(jìn)行移植．

解答 解：（1）目的基因和運(yùn)載體需用同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）切割，產(chǎn)生相同的粘性末端，通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體．
（2）為獲取更多的卵（母）細(xì)胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．采集的精子需要經(jīng)過獲能（處理），才具備受精能力．
（3）將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是顯微注射法．為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定，以選擇母羊的胚胎進(jìn)行移植．利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的全能性．
（4）若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達(dá)．
故答案為：
（1）同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）  （2）促性腺激素   獲能（處理）
（3）顯微注射法  胚胎分割  胚胎移植    全能性
（4）htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

點(diǎn)評 本題考查了基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生能夠識記基因工程的操作步驟；明確該基因工程中需要選擇母羊進(jìn)行胚胎移植；識記細(xì)胞全能性的概念等．要求考生具有扎實(shí)的基礎(chǔ)知識，難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的考查．