Question

【題目】回答下列I、II兩小題。

I．抗蟲的轉(zhuǎn)基因植物，含有Bt蛋白，也叫毒蛋白，Bt蛋白本身其實(shí)沒有任何毒性，但是鱗翅目幼蟲的腸道壁上有一種特別的蛋白，喜歡與Bt蛋白結(jié)合，引起腸道壁穿孔，導(dǎo)致幼蟲死亡。

注： Cef， Carb 抑菌類抗生素

（1）抗蟲植物的抗蟲效果與Bt蛋白的表達(dá)量直接相關(guān)，用________________ 作為抗原，通過制備________________ 作為特異探針，對(duì)Bt蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。將Bt蛋白基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有________________ 和________________ 等。

（2）在農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化過程中，防止農(nóng)桿菌過度生長(zhǎng)是轉(zhuǎn)基因成敗的重要環(huán)節(jié)。因此植物材料和農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)結(jié)束后，轉(zhuǎn)化組織需要________________ 處理，據(jù)圖分析，選擇抗生素的________________ 很關(guān)鍵。光電比色法可用于細(xì)菌細(xì)胞密度的吸光值的測(cè)定，OD600指的是某種溶液在600nm波長(zhǎng)處的吸光值。吸光值與溶液中吸光物質(zhì)的濃度呈正比，通常用于細(xì)菌細(xì)胞密度（OD600）測(cè)量；在測(cè)量過程中要保持溶液中的細(xì)菌處于____狀態(tài)。 如圖可知，________________ （填Cef或Carb）在低濃度條件下對(duì)農(nóng)桿菌有更好的抑制效果。

II．回答與泡菜制作有關(guān)的問題：

（1）泡菜發(fā)酵過程中的主要菌種是________________， 在________________ 條件下，微生物將蔬菜中的糖和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)發(fā)酵成有機(jī)酸、________________ 和________________ 等。

（2）在泡菜制作過程中________________ ，________________ 兩部操作主要是為了減少雜菌，還可以采用________________ ，________________ 兩種方法縮短腌制時(shí)間。

Answer 1

【答案】Bt蛋白 單克隆抗體 農(nóng)稈菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 脫菌 種類和濃度 懸浮 Carb 假絲酵母和乳酸菌 無(wú)氧 醇類物質(zhì) 亞硝酸（HNO2） 熱水洗壇壁兩次 加白酒 入壇前用開水浸泡一下蔬菜 加入腌制過的泡菜汁

【解析】

1.光電比色法是通過測(cè)量菌懸液的光密度（OD600）值來估算細(xì)菌數(shù)，吸光值與溶液中吸光物質(zhì)的濃度呈正比。據(jù)圖可知，濃度為300mg/L時(shí)兩種抗生素都可以完全抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)，所以頭孢霉素（Cef）和羧芐青霉素（Carb）對(duì)農(nóng)桿菌都有很好的抑制效果。

2.基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的獲取，②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，④目的基因的檢測(cè)與鑒定。

3. 制作泡菜的實(shí)驗(yàn)原理：
（1）乳酸菌在無(wú)氧條件下，將糖分解為乳酸。
（2）利用乳酸菌制作泡菜的過程中會(huì)引起亞硝酸鹽的含量的變化。
溫度過高，食鹽用量不足10%、腌制時(shí)間過短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開始下降。
（3）測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。

I．（1）抗蟲植物的抗蟲效果與Bt蛋白的表達(dá)量直接相關(guān)，可用Bt蛋白作為抗原，通過制備單克隆抗體作為特異探針，利用抗原-抗體雜交方法對(duì)Bt蛋白表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。將Bt蛋白基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和基因槍法等。

（2）在農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化過程中，防止農(nóng)桿菌過度生長(zhǎng)是轉(zhuǎn)基因成敗的重要環(huán)節(jié)。因此植物材料和農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)結(jié)束后，轉(zhuǎn)化組織需要脫菌處理，選擇合適的抗生素和使用的抗生素濃度是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。光比色法可用于細(xì)菌細(xì)胞密度的測(cè)定，在測(cè)量過程中要保持溶液中的細(xì)菌處于懸浮狀態(tài)。分析圖示可知，Cef（頭孢霉素）和Carb（羧芐霉素）兩種抗生素對(duì)農(nóng)桿菌有很好的抑制效果；當(dāng)Carb濃度為50mg/L時(shí)，OD600幾乎降為0，即細(xì)菌細(xì)胞數(shù)目為0，說明抗生素Carb濃度為50mg/L時(shí)可以完全抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)，Carb在低濃度條件下對(duì)農(nóng)桿菌有更好的抑制效果。

II．（1）泡菜發(fā)酵過程中的主要菌種是假絲酵母和乳酸菌； 在無(wú)氧條件下，微生物將蔬菜中的糖和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)發(fā)酵成有機(jī)酸、醇類物質(zhì)和亞硝酸（HNO2）等。

（2）在泡菜制作過程中熱水洗壇壁兩次（去除雜菌）、加白酒（抑制雜菌生長(zhǎng)）兩部操作主要是為了減少雜菌污染；還可以采用入壇前用開水浸泡一下蔬菜（殺死植物細(xì)胞）、加入腌制過的泡菜汁（可以提供菌種）兩種方法縮短腌制時(shí)間。