Question

7．基因工程技術(shù)已成為生物科學(xué)的核心技術(shù)，限制酶被譽(yù)為基因工程中的“分子手術(shù)刀”．圖中的Sma I、EcoR I、BamH I、Hind III都是限制酶，圖中的箭頭表示幾種限制酶的酶切位點(diǎn)．回答下列問題：

（1）基因工程的核心是構(gòu)建基因表達(dá)載體．用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒時，不能使用Sma I切割，原因是SmaI會破壞質(zhì)粒中的標(biāo)記基因和外源DNA中的目的基因．重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因，原因是它能鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因．
（2）將日的基因?qū)�入植物�?xì)胞時，采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后的表達(dá)過程中，啟動子需與RNA聚合酶識別和結(jié)合，從而驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程．最終目的基因是否成功翻譯咸蛋白質(zhì)，常用抗原-抗體雜交的方法進(jìn)行檢測，若出現(xiàn)雜交帶，表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品．

Answer 1

分析 分析圖1：質(zhì)粒上BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四種限制酶的識別序列和切割位點(diǎn)，其中SmaⅠ的切割位點(diǎn)位于抗生素抗性基因上．
分析圖2：外源DNA上含有BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四種限制酶的識別序列和切割位點(diǎn)，其中SmaⅠ的切割序列位于目的基因上．

解答 解：（1）基因工程的核心步驟為基因表達(dá)載體的構(gòu)建．質(zhì)�？股�素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，由圖可知，標(biāo)記基因和外源DNA目的基因中均含有SmaI酶切位點(diǎn)，都可以被SmaI酶破環(huán)，故不能使用該酶剪切質(zhì)粒和含有目的基因的DNA． 重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因，它能鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因．
（2）將日的基因?qū)�入植物�?xì)胞時，采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后的表達(dá)過程中，啟動子需與RNA聚合酶識別和結(jié)合，從而驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程．最終目的基因是否成功翻譯咸蛋白質(zhì)，常用抗原-抗體雜交的方法進(jìn)行檢測，若出現(xiàn)雜交帶，表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體      SmaI會破壞質(zhì)粒中的標(biāo)記基因和外源DNA中的目的基因        它能鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法       RNA聚合酶       抗原-抗體雜交

點(diǎn)評 本題結(jié)合基因結(jié)構(gòu)圖和運(yùn)載體結(jié)構(gòu)圖，考查基因工程的技術(shù)和原理，重點(diǎn)是限制酶和DNA連接酶，要求考生認(rèn)真分析圖1和圖2，能根據(jù)圖中和表中信息選擇合適的限制酶，準(zhǔn)確判斷使用DNA連接酶連接的結(jié)果，再運(yùn)用所學(xué)的知識答題．