Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）回答與柑橘加工與再利用有關(guān)的問題：

（1）柑橘果實經(jīng)擠壓獲得果汁后，需用果膠酶處理，主要目的是提高果汁的__________。為確定果膠酶的處理效果，對分別加入不同濃度果膠酶的果汁樣品，可采用3種方法進行實驗：①取各處理樣品，添加相同體積的__________，沉淀生成量較少的處理效果好。②對不同處理進行離心，用比色計對上清液進行測定，OD值__________的處理效果好。③對不同處理進行__________，記錄相同體積果汁通過的時間，時間較短的處理效果好。

（2）加工后的柑橘殘渣含有抑菌作用的香精油及較多的果膠等。為篩選生長不被香精油抑制且能高效利用果膠的細(xì)菌，從腐爛殘渣中分離得到若干菌株，分別用無菌水配制成__________，再均勻涂布在LB固體培養(yǎng)基上。配制適宜濃度的香精油，浸潤大小適宜并已__________的圓形濾紙片若干，再貼在上述培養(yǎng)基上。培養(yǎng)一段時間后，測量濾紙片周圍抑制菌體生長形成的透明圈的直徑大小。從直徑__________的菌株中取菌接種到含有適量果膠的液體培養(yǎng)基試管中培養(yǎng)，若有果膠酶產(chǎn)生，搖晃試管并觀察，與接種前相比，液體培養(yǎng)基的__________下降。

（二）回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問題：

（1）天然農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上存在著一段DNA片段（T-DNA），該片段可轉(zhuǎn)移并整合到植物細(xì)胞染色體上。為便于轉(zhuǎn)基因植物在組織培養(yǎng)階段的篩選，設(shè)計重組Ti質(zhì)粒時，應(yīng)考慮T-DNA中要有可表達(dá)的目的基因，還需要有可表達(dá)的__________。

（2）結(jié)合植物克隆技術(shù)進行轉(zhuǎn)基因?qū)嶒�，為獲得轉(zhuǎn)基因植株，農(nóng)桿菌侵染的宿主一般要選用具有優(yōu)良性狀、較高的遺傳穩(wěn)定性、__________及易被農(nóng)桿菌侵染等特點的植物材料。若植物材料對農(nóng)桿菌不敏感，則可用__________的轉(zhuǎn)基因方法。

（3）利用帶側(cè)芽的莖段獲得叢狀苗的過程與利用莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織再獲得叢狀苗的過程相比，前者總培養(yǎng)時間__________，且不經(jīng)歷__________過程，因而其遺傳性狀穩(wěn)定，是大多數(shù)植物快速繁殖的常用方法。

（4）與發(fā)芽培養(yǎng)基相比，配制轉(zhuǎn)基因叢狀苗生根培養(yǎng)基時，可根據(jù)實際情況適當(dāng)添加__________，促進叢狀苗基部細(xì)胞分裂形成愈傷組織并進一步分化形成__________，最終形成根。還可通過改變MS培養(yǎng)基促進生根，如_____（A．提高蔗糖濃度B．降低培養(yǎng)基濃度C．提高大量元素濃度D．不添加瓊脂）。

Answer 1

【答案】澄清度??? 95%乙醇??? 較小??? 抽濾??? 細(xì)菌懸液??? 滅菌??? 較小??? 粘性??? 抗性基因??? 全能性表達(dá)充分??? 顯微注射??? 短??? 脫分化??? 生長素??? 根的分生組織??? B???

【解析】

發(fā)芽培養(yǎng)基：3000mLMS培養(yǎng)基+含1.5mgBA的溶液+含0.02mgNAA的溶液+30g蔗糖+40g瓊脂，再加蒸餾水至4000mL，混合均勻加熱至瓊脂融化后，通過三角漏斗分裝至100mL，三角瓶中每瓶40mL，共100瓶三角瓶，加上封口膜后1kg壓力下在滅菌鍋內(nèi)滅菌20分鐘。

生根培養(yǎng)基：1000mLMS培養(yǎng)基+含0.38mgNAA的溶液+30g蔗糖+20g瓊脂，再加蒸餾水至2000mL，混合均勻加熱至瓊脂融化后，通過三角漏斗分裝至100mL，三角瓶中每瓶40mL，共50瓶三角瓶，加上封口膜后1kg壓力下在滅菌鍋內(nèi)滅菌20分鐘。

（一）（1）由于植物細(xì)胞壁和植物細(xì)胞間果膠的存在時，果汁的澄清度受到一定的影響，因此可以加入果膠酶使果膠降解為可溶性的半乳糖醛酸，提高果汁的澄清度。判斷果膠酶的處理效果，可采用三種方法，①看果膠的剩余量，果膠不溶于乙醇，加入95%的乙醇，沉淀量少的即果膠的剩余量少，處理效果好，②進行離心處理，取上清液測OD值，OD值越小，說明降解越充分，果膠酶的處理效果越好，③對不同處理進行抽濾，記錄相同體積果汁的通過時間，固形物含量越少，時間越短，處理效果越好。

（2）為篩選不被香精油抑制且能高效利用果膠的細(xì)菌，需從腐爛殘渣中分離菌株，用無菌水配制成細(xì)菌懸液，再涂布在LB固體培養(yǎng)基上待篩選。由于目標(biāo)是篩選不被香精油抑制的細(xì)菌，因此還需準(zhǔn)備香精油，并將其制作成濾紙片貼在培養(yǎng)基上，香精油需滅菌處理。觀察濾紙片周圍的抑菌圈，直徑越小說明該菌株越不易被香精油抑制，因而成為初步待選的菌株。再進一步接種到含果膠的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，果膠使植物細(xì)胞粘連，若果膠被降解，則液體培養(yǎng)基的粘性下降。

（二）（1）設(shè)計重組質(zhì)粒時，除了要含有可表達(dá)的目的基因，還需要有可表達(dá)的抗性基因（如抗生素抗性基因），在添加抗生素的培養(yǎng)基上，含重組質(zhì)粒的宿主細(xì)胞能夠生長，因而被篩選出來。

（2）轉(zhuǎn)基因?qū)嶒炓�求宿主�?xì)胞性狀優(yōu)良、遺傳穩(wěn)定性較高、全能性（細(xì)胞發(fā)育成個體的潛能）較高及易被農(nóng)桿菌侵染等特點。若植物材料對農(nóng)桿菌不敏感，可采用顯微注射的方法。

（3）利用帶側(cè)芽的莖段獲得叢狀苗的過程，比利用莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織獲得叢狀苗的過程時間更短，因為不需要經(jīng)歷脫分化的過程，而且遺傳性狀穩(wěn)定。植物器官的分化需要一定的營養(yǎng)物質(zhì)及適宜的激素配比，配制叢狀苗生根培養(yǎng)基需根據(jù)實際情況添加生長素，促進基部細(xì)胞形成愈傷組織，并進一步分化形成根的分生組織，最終形成根。比較發(fā)芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基可知MS培養(yǎng)基的濃度下降，因此可降低培養(yǎng)基的濃度促進生根。故選B。