Question

18．如圖表示分離、純化及保存枯草芽孢桿菌菌株的簡要過程，回答下列問題：

（1）將土壤表層泥土稀釋液煮沸15min后獲得的樣品中，仍然含有一些活的菌種，原因是煮沸消毒法不能殺死細菌的全部芽孢和孢子．
（2）圖中將菌種接種到平板1的方法是稀釋涂布平板法；將菌種接種到平板2之前，接種工具常用灼燒滅菌（灼燒）法進行滅菌．為了逐步分離、純化得到目的菌種，平板1和平板2中的培養(yǎng)類型都應(yīng)該屬于選擇培養(yǎng)基．對于使用頻繁的菌種可接種到上圖試管中的固體斜面培養(yǎng)基上臨時保藏．
（3）用稀釋涂布平板法在5個平板上都接種稀釋倍數(shù)為10⁴的樣品液0.1mL，培養(yǎng)一段時間后，平板長出來的菌落數(shù)分別為182、160、168、175和190，據(jù)此推測，每mL樣品液中的細菌數(shù)量為1.75×10⁷個．稀釋涂布平板法能夠通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)目，原因是當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．

Answer 1

分析 1、無菌技術(shù)的主要內(nèi)容：
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒；
②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌
③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行；
④實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸．
2、消毒和滅菌：

比較項目	理化因素的作用強度	消滅微生物的數(shù)量	芽孢和孢子能否被消滅
消毒	較為溫和	部分生活狀態(tài)的微生物	不能
滅菌	強烈	全部微生 物	能

3、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．

解答 解：（1）煮沸消毒法不能殺死細菌的全部芽孢和孢子，因此土壤表層泥土稀釋液煮沸15min后獲得的樣品中，仍然含有一些活的菌種．
（2）分析圖解可知，圖示平板1利用涂布棒進行涂布稀釋，即圖中將菌種接種到平板1的方法為稀釋涂布平板法；將菌種接種到平板2之前，接種工具常用灼燒滅菌（灼燒）法進行滅菌．為了逐步分離、純化得到目的菌種，平板1和平板2中的培養(yǎng)類型都應(yīng)該屬于選擇培養(yǎng)基．對于使用頻繁的菌種可接種到上圖試管中的固體斜面培養(yǎng)基上臨時保藏．
（3）用稀釋涂布平板法在5個平板上都接種稀釋倍數(shù)為10⁴的樣品液0.1mL，培養(yǎng)一段時間后，平板長出來的菌落數(shù)分別為182、160、168、175和190，據(jù)此推測，每mL樣品液中的細菌數(shù)量=（182+160+168+175+190）÷5÷0.1×10⁴=1.75×10⁷個．當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，因此稀釋涂布平板法能夠通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)目．
故答案為：
（1）煮沸消毒法不能殺死細菌的全部芽孢和孢子
（2）稀釋涂布平板法      灼燒滅菌（灼燒）   選擇   固體斜面
（3）1.75×10⁷   當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌

點評 本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生能夠掌握培養(yǎng)基的類型和功能，識記滅菌和消毒概念的區(qū)別，掌握平板劃線法和稀釋涂布平板法的相關(guān)操作步驟，再結(jié)合所學知識準確答題．