Question

人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉htPA基因母羊的羊乳中獲得．流程如下：

（1）htPA基因與載體用

 

切割后，通過DNA連接酶連接，以構建重組表達載體．檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可采用

 

技術．
（2）將重組表達載體導入受精卵常用的方法是

 

．為了獲得母羊，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行

 

．利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細胞的

 

．
（3）若在轉ht-PA基因母羊的羊乳中檢測到

 

，說明目的基因成功表達．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術．

解答： 解：（1）htPA基因與載體需要用同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通過DNA連接酶連接，以構建重組表達載體．檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術，原理是堿基互補配對．
（2）為獲取更多的卵（母）細胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．采集的精子需要經(jīng)過獲能（處理），才具備受精能力．利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細胞的全能性．
（3）基因表達成功時可獲得目的基因的產(chǎn)物，既在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．
故答案為：
（1）同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）    DNA分子雜交（或核酸探針）
（2）超數(shù)排卵    獲能（處理）   全能性
（3）htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

點評：本題考查了基因工程和胚胎工程的相關知識，要求考生能夠識記基因工程的操作步驟；識記細胞全能性的概念等．