Question

7．1中含有鏈霉素，其它培養(yǎng)基中不含鏈霉素．請據實驗回答：

（1）將原始對鏈霉素敏感大腸桿菌K12菌種涂布在培養(yǎng)皿1的表面培養(yǎng)，接著通過右圖“印章”將培養(yǎng)皿1中的菌群“印”在培養(yǎng)皿2、3上培養(yǎng)．“印章”位置保持不變．培養(yǎng)皿2、3根據其功能，分別稱為通用培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基．
（2）培養(yǎng)基3的A點處有菌落生長，將培養(yǎng)基2中相應的A點位置的菌落上挑出少量移入培養(yǎng)基4中．如圖反復幾次實驗．請根據實驗現象解釋“微生物的突變是自發(fā)的還是環(huán)境因素導致的”：自發(fā)突變的．
（3）要分離出單個菌落，除了本實驗中的涂布法外，還可以用劃線法．
（4）上述不含鏈霉素培養(yǎng)基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，下表是另一種培養(yǎng)基配方，該培養(yǎng)基具有選擇作用．

成分	KH2PO4	Na2PO4	MgSO4•7H2O	葡萄糖		尿素	瓊脂
含量	1.4g	2.1g	0.2g		0.0g	1.0g	15.0g

（5）現有5種營養(yǎng)缺陷型菌株1、2、3、4、5，它們不能合成生長所必需的物質G，已知A、B、C、D、E都是合成G物質的必需中間產物，但不知這些物質合成的順序，于是在培養(yǎng)基中分別加入這幾種物質并分析了這幾種物質對各種營養(yǎng)缺陷型菌株生長的影響，結果如下表所示．根據以上結果，推測這幾種物質的合成順序應是E→A→C→B→D→G．

物質 突變體	培養(yǎng)基中加入的物質
	A	B	C	D	E	F
1	-	-	-	+	-	+
2	-	+	-	+	-	+
3	-	-	-	-	-	+
4	-	+	+	+	-	+
5	+	+	+	+	-	+

Answer 1

分析 影印法接種的具體過程是：將待測的濃縮菌懸液涂在合適的平板上，等其長好后作為母平板（每平板上的菌落控制在50～300個）；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構成印章（即接種工具）；然后把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基的平板上輕輕印一下，經培養(yǎng)后，選擇培養(yǎng)基平板上長出的菌落與母平板上的菌落位置對應，比較影印平板與母平板上菌落生長情況，即可從相應位置的母平板上選出待測的突變型菌落．影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發(fā)的、與相應的環(huán)境因素無關而設計的實驗，目前已廣泛應用于營養(yǎng)缺陷型的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中．

解答 解：（1）培養(yǎng)基2，不論是對鏈霉素敏感的大腸桿菌K12還是抗鏈霉素大腸桿菌K12都能在上面生長，所以是通用培養(yǎng)基；培養(yǎng)基3加入了鏈霉素，只有抗鏈霉素大腸桿菌K12才能在上面生長，所以是選擇培養(yǎng)基；印章在使用前必須進行滅菌處理，以消除印章上的雜菌對實驗結果的影響．
（2）通過題圖及問題描述分析可知，抗鏈霉素菌種的獲得是從沒有接觸過鏈霉素的敏感細菌中獲得的，所以抗鏈霉素菌種的突變是自發(fā)突變，不是環(huán)境因素引起．
（3）由題圖看出，接種時用的是稀釋涂布平板法，除此以外分離菌種常用的方法還有平板劃線法．
（4）題圖中不含鏈霉素的培養(yǎng)基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，分析表格中的培養(yǎng)基配方可知，在該配方中，尿素作為唯一氮源，只有能分解尿素的菌才能在上面生長，所以是選擇培養(yǎng)基．
（5）有表格可知，加入G，5種突變體都能在上面生長，加入D，4種突變體能在上面生長，加入B，3種突變體能在上面生長，加入C，2種突變體能在上面生長，加入A，1種突變體能在上面生長，加入E，5種突變體都不能在上面生長．所以這幾種物質的合成順序應是E→A→C→B→D→G．
故答案應為：
（1）通用    選擇
（2）自發(fā)突變的
（3）劃線
（4）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基     選擇
（5）E→A→C→B→D→G

點評 本題主要考查微生物的影印法培養(yǎng)，意在考查選擇培養(yǎng)的過程，提高學生的實驗過程分析能力和相關實驗技能．