Question

9．如圖為三種質粒和一個含目的基因的片段的示意圖．復制原點是質粒能正常復制的必需組成．圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lcZ為藍色顯色基因，lacZ正常表達菌落呈藍色．EcoRⅠ、PvuⅠ為相應的限制酶切割位點，括號內(nèi)的數(shù)據(jù)是該切點與復制原點的距離，單位為kb（1kb=1000個堿基對）．回答下列問題：

（1）用圖中的目的基因與質粒構建基因表達載體時，應該選擇質粒質粒B（填“質粒A”“質粒B”或者“質粒C”），選擇的限制酶是PvuⅠ．
（2）轉錄的起始部位稱為啟動子，是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別與結合的部位．
（3）如果選擇的質粒與目的基因重組成功，并且在受體細胞中能正常表達，則所形成的重組質粒用EcoRⅠ完全酶切，并進行電泳觀察，可出現(xiàn)的片段長度有3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb．
（4）導入大腸桿菌后，為了篩選出含目的基因的大腸桿菌，在普通瓊脂培養(yǎng)基中還需加入氨芐青霉素，形成的菌落顏色為白色．

Answer 1

分析 分析題圖：基因表達載體由啟動子、終止子、標記基因和目的基因組成．質粒A中缺少標記基因，質粒C中的復制原點會被酶PvuⅠ切割，所以用圖中的目的基因與質粒構建基因表達載體時，應該選擇質粒B．

解答 解：（1）含有目的基因的外源DNA中含有兩種限制酶的切割位點，但用限制酶EcoRⅠ切割會破壞目的基因，因此只能選擇限制酶PvuⅠ進行切割．質粒A中缺少標記基因，質粒C中的復制原點會被酶PvuⅠ切割，所以用圖中的目的基因與質粒構建基因表達載體時，應該選擇質粒B．
（2）轉錄的起始部位稱為啟動子，是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別和結構的部位．
（3）質粒長度為2.7kb，目的基因長度為4.0kb，所以重組質粒長度為6.7kb，目的基因與運載體重組時可能會正向連接，也可能會反向連接，因此所形成的重組質粒用EcoRⅠ完全酶切，并進行電泳觀察，可出現(xiàn)的片段長度有3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb．
（4）用限制酶PvuⅠ切割會破壞質粒B中的lcZ基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入大腸桿菌后，為了篩選出含目的基因的大腸桿菌，在普通瓊脂培養(yǎng)基中還需加入氨芐青霉素，形成的菌落顏色為白色．
故答案為：
（1）質粒B              PvuⅠ
（2）啟動子                識別與結合
（3）3.6kb、3.1kb         1.1kb、5.6kb
（4）氨芐青霉素          白色

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結合圖中信息準確答題．