Question

【題目】圖一為含有目的基因的DNA（外源DNA），圖二為某質(zhì)粒，表中是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)。用圖中的外源DNA與質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒。請(qǐng)根據(jù)上述信息分析回答：

限制酶	BamⅠ	SmaⅠ	EcoRⅠ	HinRⅢ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

【1】外源DNA有_____個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

【2】DNA分子的一條多核苷酸鏈中，兩個(gè)脫氧核苷酸之間以_____和_____相連。用SmaⅠ限制酶切割外源DNA，切開的是_____和_____之間相連的鍵。

【3】如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和質(zhì)粒來(lái)重組質(zhì)粒，其結(jié)果是_____。

【4】如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和質(zhì)粒，將目的基因片段與切割后的質(zhì)�；旌�，加入_____酶，獲得的環(huán)狀DNA可能有哪幾種情況？_____。

【5】如果使用BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶同時(shí)處理外源DNA和質(zhì)粒，比用EcoRⅠ酶切割的優(yōu)點(diǎn)是_____。

【6】將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中，培養(yǎng)基中需加入_____進(jìn)行鑒別和篩選含有重組質(zhì)粒（目的基因）的細(xì)胞。

Answer 1

【答案】

【1】2

【2】 磷酸基團(tuán) 五碳糖 G C

【3】目的基因與抗性基因被破壞

【4】 DNA連接 原質(zhì)粒切割的粘性末端重新連接；目的基因的粘性末端連接而成環(huán)狀；目的基因與切割質(zhì)粒形成重組質(zhì)粒

【5】避免切割的外源DNA、質(zhì)粒的粘性末端自身環(huán)化

【6】抗生素

【解析】

【1】圖一中外源DNA為線性，因每條鏈上含有一個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，故外源DNA分子中有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

【2】DNA分子的一條多核苷酸鏈中，兩個(gè)脫氧核苷酸之間以磷酸基團(tuán)和五碳糖相連。由題可知，SamⅠ識(shí)別的DNA序列只有G和C，故用SmaⅠ限制酶切割外源DNA，切開的是G和C之間相連的鍵。

【3】由圖示可知，SmaⅠ酶切割位點(diǎn)位于抗性基因和目的基因中間，故如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和質(zhì)粒來(lái)重組質(zhì)粒，其結(jié)果是目的基因與抗性基因被破壞。

【4】如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和質(zhì)粒，將目的基因片段與切割后的質(zhì)�；旌�，加入DNA連接酶，獲得的環(huán)狀DNA可能有原質(zhì)粒切割的粘性末端重新連接、目的基因的粘性末端連接而成環(huán)狀和目的基因與切割質(zhì)粒形成重組質(zhì)粒。

【5】如果使用BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶同時(shí)處理外源DNA和質(zhì)粒，這樣目的基因的兩端的黏性末端不同，質(zhì)粒的兩端黏性末端也不同，故比用EcoRⅠ酶切割的優(yōu)點(diǎn)是避免切割的外源DNA、質(zhì)粒的粘性末端自身環(huán)化。

【6】由于重組質(zhì)粒上有抗性基因和目的基因，故可通過(guò)抗性基因的特性進(jìn)行篩選，為了鑒定重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌中，可在培養(yǎng)基中加入抗生素進(jìn)行鑒別和篩選含有重組質(zhì)粒（目的基因）的細(xì)胞。