Question

【題目】凝乳酶是干酪和干酪素生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵酶，動植物及微生物均能產(chǎn)生。由于微生物資源豐富、生長周期短，受氣候等因素限制小等特點，微生物凝乳酶成為研究熱點。為獲得凝乳酶高產(chǎn)菌株，科研人員進行了以下分離、篩選、鑒定工作。

培養(yǎng)基配方表：

（1）從作用上看，該培養(yǎng)基屬于______________（填“選擇”或“鑒別”）培養(yǎng)基。

（2）科研人員將牧區(qū)采集的土壤樣品放入無菌水中，振蕩混勻，制成懸液。為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進行______________，用________________法接種于上述培養(yǎng)基上。接種后的培養(yǎng)基以______________狀態(tài)放入培養(yǎng)箱。

（3）在涂布接種前，科研人員隨機取若干滅菌后的空白平板先進行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是_____________________________________。

（4）在稀釋倍數(shù)為106倍下涂布了三個平板（每次取0.1mL），統(tǒng)計菌落數(shù)分別為240、250、260，則稀釋前1mL菌液中所含此菌數(shù)量為_________________。

（5）挑選菌落時以白色沉淀圈大且透明圈小者為佳。將獲得的菌株進行液體培養(yǎng)后，從培養(yǎng)液的_____________（填“上清液”或“沉淀物”）獲得粗提的凝乳酶。將一定量的粗提凝乳酶與適量酪蛋白溶液混合，一定時間后測定吸光值來測定酶活性。進行吸光值測定時，需將__________與等量酪蛋白溶液混合，作為實驗的對照。

Answer 1

【答案】選擇 梯度稀釋 （稀釋）涂布平板 倒置 檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 2.5×109 上清液 等量失活的粗提凝乳酶

【解析】

酪蛋白是哺乳動物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白質(zhì)。牛奶的蛋白質(zhì)，主要以酪蛋白為主，人奶以白蛋白為主。酪蛋白是一種大型、堅硬、致密、極困難消化分解的凝乳。哺乳動物胃液中有凝乳酶，能使乳中蛋白質(zhì)凝聚成乳酪，乳酪易為各種蛋白酶所消化。凝乳酶是生產(chǎn)干酪不可缺少的制劑，微生物因其具有生長周期短，產(chǎn)量高，受時間、空間限制小，生產(chǎn)成本低，提取方便，經(jīng)濟效益高等優(yōu)點，是目前凝乳酶來源最有前途的發(fā)展方向。

（1）由于實驗目的是獲得凝乳酶高產(chǎn)菌株，凝乳酶能使乳中酪蛋白凝聚成乳酪，所以培養(yǎng)基中需要加入酪蛋白，從作用上看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進行梯度稀釋，并用涂布平板法接種于固體培養(yǎng)基上。為防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，接種后的培養(yǎng)基應以倒置狀態(tài)放入培養(yǎng)箱。

（3）在涂布接種前，取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)一段時間，其目的是檢驗培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。

（4）三個平板菌落的平均數(shù)為（240+250+260）÷3=250，稀釋倍數(shù)為106，每次取0.1mL，所以稀釋前1mL菌液中所含細菌數(shù)為250÷0.1×106=2.5×109個。

（5）挑選菌落時凝乳效果較好的為白色沉淀圈大且透明圈小的。將獲得的菌株進行液體培養(yǎng)后，從培養(yǎng)液的上清液獲得粗提的凝乳酶。將一定量的粗提凝乳酶與適量酪蛋白溶液混合，一定時間后測定吸光值來測定酶活性。進行吸光值測定時，需將等量失活的粗提凝乳酶與等量酪蛋白溶液混合，作為實驗的對照。