Question

【題目】科學(xué)家從某無限增殖細胞的細胞質(zhì)中分離出無限增殖調(diào)控基因（prG)，該基因能激發(fā)細胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了新思路。某國家重點實驗室準(zhǔn)備探索利用基因工程生產(chǎn)單克隆抗體，請回答下列問題：

（1）實驗室已獲得無限增殖調(diào)控基因（prG)。在體外，可采用__________技術(shù)大量擴增該目的基因。該技術(shù)的基本反應(yīng)過程：目的基因DNA受熱___________后解鏈為單鏈，____________與單鏈相應(yīng)互補序列結(jié)合，然后在DNA聚合酶的作用下進行____________，如此重復(fù)循環(huán)多次。該技術(shù)的前提是要有___________，以便根據(jù)這一序列合成引物。

（2）該基因工程操作的核心是_________。本研究中，受體細胞為__________，欲將目的基因轉(zhuǎn)入受體細胞，常采用___________方法。若實驗成功，則受體細胞既能____________，又能____________。

（3）制備單克隆抗體通常選用細胞融合技術(shù)，使_______細胞與___________細胞融合，融合成功的細胞經(jīng)過篩選就是所需要的_____________細胞。

Answer 1

【答案】 PCR 變性 引物 延伸 一段已知目的基因的核苷酸序列 基因表達載體的構(gòu)建 （經(jīng)抗原刺激）B細胞 顯微注射 無限增殖 產(chǎn)生抗體 （經(jīng)抗原刺激）B 骨髓瘤 雜交瘤

【解析】試題分析：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。PCR的原理是DNA復(fù)制，需要的條件包括：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶)。PCR擴增DNA的過程包括：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸過程。因此，利用PCR技術(shù)擴增目的基因的過程中，目的基因受熱形成單鏈并與引物結(jié)合，在Taq聚合酶的作用下延伸形成DNA。基因工程操作的四個基本步驟是：獲取目的基因,基因表達載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細胞和目的基因的檢測與鑒定.當(dāng)動物細胞作受體細胞時,一般采用顯微注射法將目的基因?qū)��?/span>。

(1) 結(jié)合前面的分析，為了得到大量的目的基因，可通過PCR技術(shù)實現(xiàn)。該技術(shù)首先是將目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，加入的一對引物分別與解開的兩條單鏈相應(yīng)互補序列結(jié)合，然后在DNA聚合酶的作用下進行延伸，如此重復(fù)循環(huán)多次。該技術(shù)的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。

(2)基因工程操作的四個基本步驟是：獲取目的基因、基因表達載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細胞和目的基因的檢測與鑒定。其中核心步驟是基因表達載體的構(gòu)建。抗體是由已獲得免疫的(經(jīng)抗原刺激)B細胞分泌的，將目的基因?qū)�入動物細胞常采用的方法是顯微注射法，若實驗成功，則受體細胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗體。

(3)制備單克隆抗體通常選用細胞融合技術(shù)，使(經(jīng)抗原刺激)B細胞與骨髓瘤細胞融合，融合成功的細胞經(jīng)過篩選就是所需要的雜交瘤細胞。