Question

12．我國(guó)目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是一種叫做乙肝表面抗原的蛋白質(zhì)（S蛋白，對(duì)應(yīng)的基因?yàn)镾基因），請(qǐng)回答下列問(wèn)題．
（1）在這項(xiàng)技術(shù)中，S基因?qū)儆谀康幕�因�?br />（2）用同一種限制酶處理S基因和運(yùn)載體，并用DNA連接酶使之結(jié)合，這里的DNA片段兩兩結(jié)合的產(chǎn)物有3種，除了S基因，構(gòu)建好的表達(dá)載體還應(yīng)具有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等結(jié)構(gòu)．
（3）將表達(dá)載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞，篩選得到工程細(xì)胞．使用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)工程細(xì)胞時(shí)，通常需要加入動(dòng)物血清等天然成分．工程細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中有貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，以便于分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，在培養(yǎng)過(guò)程中，定期收集培養(yǎng)液，分離純化即可得到所需產(chǎn)品．

Answer 1

分析 DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
由于基因的選擇性表達(dá)，在利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物時(shí)，要將藥用蛋白基因和乳腺組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起．
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)關(guān)鍵詞辨析：
1、細(xì)胞貼壁：培養(yǎng)時(shí)，懸液中的細(xì)胞會(huì)很快貼附在瓶壁上．
2、細(xì)胞的接觸抑制：細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖．（癌細(xì)胞無(wú)接觸抑制）

解答 解：（1）在基因工程技術(shù)中，S基因?qū)儆谀康幕�因�?br />（2）在基因表達(dá)載體構(gòu)建的過(guò)程中，要用同一種限制酶處理S基因和運(yùn)載體，并用DNA連接酶使之結(jié)合．由于目的基因和運(yùn)載體均具有相同黏性末端，因此這里的DNA片段兩兩結(jié)合的產(chǎn)物有目的基因自身連接、運(yùn)載體自身連接和重組質(zhì)粒3種．除了S基因，構(gòu)建好的表達(dá)載體還應(yīng)具有啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等結(jié)構(gòu)．
（3）在對(duì)工程細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞過(guò)程中，培養(yǎng)基中通常需要加入動(dòng)物血清等天然成分．細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中有貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理使細(xì)胞分散，以便于分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，在培養(yǎng)過(guò)程中，定期收集培養(yǎng)液，分離純化即可得到所需產(chǎn)品．
故答案為：
（1）目的基因
（2）同一種限制酶 DNA連接酶 3   啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因
（3）動(dòng)物血清 貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制 胰蛋白酶或膠原蛋白酶

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程以及細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，考生要識(shí)記基因工程的相關(guān)操作工具；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分以及細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)；識(shí)記動(dòng)物基因工程的過(guò)程等相關(guān)知識(shí)，難度適中．