Question

7．Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞．科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療．其技術流程如圖：

請回答：
（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的細胞核．
（2）ES細胞除來源于早期胚胎外，還可來源于原始性腺，它在形態(tài)上的特性體積小、細胞核大、核仁明顯；在功能上的特性是具有發(fā)育的全能性，即可以分化為成年動物體內任何一種組織細胞．
（3）步驟③中，需要構建含有Rag2基因的表達載體．可以根據Rag2基因的核苷酸序列設計引物，利用PCR技術擴增Rag2基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段．為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ限制酶的酶切位點．
（4）為檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞中的蛋白質，用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過程，③表示采用基因工程技術將目的基因導入受體細胞．

解答 解：（1）核移植是將體細胞核移植到去核的卵母細胞中，所以實驗前要去除卵母細胞的細胞核．
（2）ES細胞來源于早期胚胎和原始性腺，它在形態(tài)上的特性是：體積小、細胞核大、核仁明顯；在功能上的特性是具有發(fā)育的全能性，即可以分化為成年動物體內任何一種組織細胞．
（3）步驟③中，根據Rag₂基因的核苷酸序列設計引物并擴增Rag₂基因片段．基因工程中構建基因表達載體時，應用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，若用HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag₂基因片段，則為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點．
（4）為檢測Rag₂基因的表達情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細胞的蛋白質（抗原），用抗Rag₂ 蛋白的抗體進行雜交實驗．
故答案為：
（1）細胞核
（2）原始性腺       體積小、細胞核大、核仁明顯        具有發(fā)育的全能性，即可以分化為成年動物體內任何一種組織細胞
（3）核苷酸序列      HindⅢ和PstⅠ限制酶
（4）蛋白質

點評 本題結合圖解，綜合考查基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)問題；識記核移植的具體過程；識記體外受精的具體過程及早期胚胎發(fā)育的過程，能結合所學的知識準確答題．