Question

8．如圖為綠色熒光小鼠制備流程圖，Gfp是綠色熒光蛋白基因，請分析回答：

（1）構建表達載體需要的酶是：限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶，表達載體包含綠色熒光蛋白基因Gfp、標記基因、啟動子、終止子和復制原點等；構建表達載體的目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，表達和發(fā)揮作用，并可遺傳給下代．
（2）提取Gfp基因時常用到PCR技術，PCR擴增目的基因時，首先要根據(jù)目的基因的核苷酸序列合成引物；需要加入兩種引物，原因是DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈，用兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時被擴增．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示為綠色熒光小鼠制備流程圖，其中①表示基因表達載體的構建過程；②表示將表達載體導入胚胎干細胞；③表示胚胎干細胞的體外培養(yǎng)過程；④表示沖卵，即沖出胚胎的過程；⑤表示將胚胎干細胞團注入囊胚；⑥表示胚胎移植過程．

解答 解：（1）構建表達載體時，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和運載體，還需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組質粒；表達載體包含目的基因（綠色熒光蛋白基因Gfp）、標記基因、啟動子、終止子和復制原點等．構建表達載體的目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，表達和發(fā)揮作用，并可遺傳給下代．
（2）提取Gfp基因時常用到PCR技術，PCR擴增目的基因時，首先要根據(jù)目的基因的核苷酸序列合成引物；DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈，因此需要加入兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時被擴增．
故答案為：
（1）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶      標記基因   啟動子 （這兩空可以互換順序）      穩(wěn)定存在，表達和發(fā)揮作用
（2）目的基因的核苷酸序列        DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈

點評 本題結合綠色熒光小鼠制備流程圖，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結合圖中信息答題．