Question

20．為驗(yàn)證某種中藥牙膏是否像其廣告宣傳的一樣具有較強(qiáng)的抑菌功效，老師帶領(lǐng)生物興趣小組的同學(xué)設(shè)計了如下實(shí)驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)過程符合無菌操作要求）：
①用無菌水漱口，向漱口液中加入適量的該中藥牙膏；
②配制牛肉膏蛋自胨固體培養(yǎng)基；
③將上述樣品接種到培養(yǎng)基上，在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)；
④一段時間后，對培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行觀察并進(jìn)行菌落計數(shù)．
請分析上述實(shí)驗(yàn)過程并回答下列問題：
（1）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般步驟是：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板；培養(yǎng)基中牛肉膏的作用主要是為微生物生長提供碳源、磷酸鹽、維生素、氮源等營養(yǎng)物質(zhì)；培養(yǎng)基滅菌常用的方法是高壓蒸氣滅菌．
（2）如何證明所用培養(yǎng)基已經(jīng)徹底滅菌？對未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，如無菌落出現(xiàn)，則證明培養(yǎng)基滅菌徹底．
（3）本實(shí)驗(yàn)樣品接種時最好采用稀釋涂布平板方法．培養(yǎng)一段時間后，培養(yǎng)基表面長出菌落，每一個標(biāo)準(zhǔn)菌落來源于樣品中的一個活菌．
（4）請指出本實(shí)驗(yàn)設(shè)計中的一個明顯的錯誤，并加以改正．沒有設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)．應(yīng)將漱口液分為兩份，一份加牙膏，一份不加牙膏分別接種培養(yǎng)．

Answer 1

分析 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般步驟是：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌，接種的方法一般有平板劃線法和稀釋涂布平板法．
本實(shí)驗(yàn)還應(yīng)該設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，應(yīng)將漱口液分為兩份，一份加牙膏，一份不加牙膏分別接種培養(yǎng)，還要對未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，如無菌落出現(xiàn)，則證明培養(yǎng)基滅菌徹底．

解答 解：（1）制備牛肉青蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般步驟是：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．牛肉膏可以提供碳源、磷酸鹽、維生素、氮源等．培養(yǎng)基在分裝前往往要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌．
（2）證明所用培養(yǎng)基是否徹底滅菌，應(yīng)該對未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)，如無菌落出現(xiàn)，則證明培養(yǎng)基滅菌徹底．
（2）因?yàn)榇藰悠酚霉腆w培養(yǎng)基接種且培養(yǎng)一段時間后，培養(yǎng)基表面長出菌落，所以接種最好采用稀釋涂布平板法；菌落是由單個細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或一堆同種細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長繁殖到一定程度，形成肉眼可見的子細(xì)胞種群．
（4）本實(shí)驗(yàn)設(shè)計中的一個明顯錯誤是沒有設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，應(yīng)將漱口液分為兩份，一份加牙膏，一份不加牙膏分別接種培養(yǎng)．
故答案為：
（1）溶化     倒平板      碳源、磷酸鹽、維生素、氮源      高壓蒸氣滅菌
（2）對未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，如無菌落出現(xiàn)，則證明培養(yǎng)基滅菌徹底
（3）稀釋涂布平板     一個活菌
（4）沒有設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)．應(yīng)將漱口液分為兩份，一份加牙膏，一份不加牙膏分別接種培養(yǎng)

點(diǎn)評 本題以中藥牙膏為素材，考查微生物培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)設(shè)計的相關(guān)知識，要求考生識記培養(yǎng)基的制備步驟、培養(yǎng)基的成分及滅菌方法和接種方法；要求考生掌握實(shí)驗(yàn)設(shè)計的原則，特別是對照原則和單一變量原則，能對實(shí)驗(yàn)進(jìn)行完善．