Question

12．臨床使用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)．實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌對(duì)不同抗生素的敏感性．回答下列問(wèn)題：
（1）為統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，常將樣品用稀釋涂布法接種于培養(yǎng)基表面．運(yùn)用活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落．
（2）為了檢驗(yàn)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，在該病菌菌落均勻生長(zhǎng)的平板的不同位置，分別放置含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片，培養(yǎng)一段時(shí)間后，在四個(gè)濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B，由此推斷，該病人目前適合使用的抗生素A．含C的濾紙片周圍透明圈比含A的小，說(shuō)明該病人該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)A的弱；若抗生素B的濾紙片周圍沒(méi)有出現(xiàn)透明圈，最可能的原因是長(zhǎng)期服用抗生素B導(dǎo)致的結(jié)果；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)一個(gè)菌落，這種菌落的出現(xiàn)可能是由于接種過(guò)程不嚴(yán)格導(dǎo)致的，也可能是產(chǎn)生了抗生素D的耐藥菌，這種變異的特點(diǎn)是隨機(jī)的、不定向的（普遍性、頻率很低等其他答案也可以）（至少列舉兩個(gè)）．
（3）實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)基需用高壓蒸汽滅菌、接種環(huán)用灼燒滅菌、接種過(guò)程也在酒精燈火焰旁進(jìn)行，其達(dá)到的目的是防止外來(lái)微生物的污染．

Answer 1

分析 1、微生物常見(jiàn)的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、無(wú)菌技術(shù)：消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對(duì)象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

解答 解：（1）接種微生物常用稀釋涂布平板法和平板劃線法，其中稀釋涂布平板法能統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目；用該方法計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，因此統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低． 
（2）透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B，可見(jiàn)抗生素A的作用效果最好，因此該病人目前適合使用抗生素A．對(duì)抗生素越敏感，形成的透明圈越大，若含C的濾紙片周圍透明圈比含A的小，說(shuō)明該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)A的弱；若抗生素B的濾紙片周圍沒(méi)有出現(xiàn)透明圈，最可能的原因是長(zhǎng)期服用抗生素B導(dǎo)致的結(jié)果；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)一個(gè)菌落，這種菌落的出現(xiàn)可能是由于接種過(guò)程不嚴(yán)格導(dǎo)致的，也可能是產(chǎn)生了抗生素D的耐藥菌，其形成的根本原因是基因突變，其特點(diǎn)是普遍性、隨機(jī)性、不定向性、低頻性等．
（3）實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)基需用高壓蒸汽滅菌、接種環(huán)用灼燒滅菌、接種過(guò)程也在酒精燈火焰旁進(jìn)行，其達(dá)到的目的是防止外來(lái)微生物的污染．
故答案為：
（1）稀釋涂布     當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落
（2）A    該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)A的弱    長(zhǎng)期服用抗生素B       隨機(jī)的、不定向的
（3）高壓蒸汽      防止外來(lái)微生物的污染

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記接種微生物常用的兩種方法；識(shí)記無(wú)菌技術(shù)及實(shí)例；識(shí)記微生物的計(jì)數(shù)方法，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．