Question

4．如圖是基因表達載體結(jié)構(gòu)示意圖，請根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題：
（1）圖中A段的功能是終止轉(zhuǎn)錄，抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因．
（2）構(gòu)建基因表達載體時需要用到兩種工具酶．若所使用的限制酶僅有SmaⅠ，其識別的堿基序列和酶切位點為CCC^↓GGG，則要求使用T₄DNA連接酶；有時發(fā)現(xiàn)在條件適宜時，部分重組質(zhì)粒中目的基因與質(zhì)粒反向不正常連接，則該目的基因不能（能/不能）正確表達．
（3）若要獲得轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻，常用的將目的基因?qū)�入水稻�?xì)胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．檢測抗蟲基因是否在水稻植株體內(nèi)發(fā)揮功能的第一步，采用分子雜交技術(shù)；最終還需要進行個體生物學(xué)水平的鑒定，即需要做進行抗蟲的實驗．
（4）若要獲得一種轉(zhuǎn)基因豬，利用其乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人類凝血因子Ⅷ（簡稱F₈），F(xiàn)₈基因可從
cDNA文庫中獲取，若要在體外大量復(fù)制，常采用PCR技術(shù)，這樣獲得的目的基因，不能（能/不能）用作人類基因組測序．構(gòu)建基因表達載體時，在F₈基因的首端必須有乳腺蛋白基因的啟動子．

Answer 1

分析 1、基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因，其中啟動子在基因的首段，它是RNA聚合酶的結(jié)合位點，能控制著轉(zhuǎn)錄的開始；終止子在基因的尾端，它控制著轉(zhuǎn)錄的結(jié)束；標(biāo)記基因便于目的基因的鑒定和篩選．
2、分析題圖：圖示為基因表達載體的模式圖，基因表達載體包括復(fù)制原點、啟動子、終止子、目的基因（插入基因）、標(biāo)記基因（抗生素抗性基因）等．

解答 解：（1）圖中A段為終止子，其功能是終止轉(zhuǎn)錄，抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因，便于篩選含有重組子的受體細(xì)胞．
（2）限制酶SmaⅠ的識別的堿基序列和酶切位點為CCC^↓GGG，其切割形成平口末端，只有T₄DNA連接酶能夠連接平口末端；有時發(fā)現(xiàn)在條件適宜時，部分重組質(zhì)粒中目的基因與質(zhì)粒反向不正常連接，則該目的基因不能正確表達．
（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；檢測抗蟲基因是否在水稻植株體內(nèi)發(fā)揮功能的第一步，采用分子雜交技術(shù)；最終還需要進行個體生物學(xué)水平的鑒定，即需要做進行抗蟲的實驗．
（4）PCR技術(shù)可體外大量復(fù)制目的基因；cDNA文庫中不含啟動子、內(nèi)含子等，因此這樣獲得的目的基因不能用作人類基因組測序．構(gòu)建基因表達載體時，在F₈基因的首端必須有乳腺蛋白基因的啟動子．
故答案為：
（1）終止轉(zhuǎn)錄    標(biāo)記基因
（2）T₄      不能
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法     分子雜交    進行抗蟲的實驗
（4）PCR     不能     啟動子

點評 本題結(jié)合基因表達載體的模式圖，考查基因工程的原理及技術(shù)，要求考生識記基因工程的原理、工具、操作步驟及應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確判斷各選項，屬于考綱識記層次的考查．