Question

12．肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強，會引發(fā)肺癌．研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實驗表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制．該基因工程技術(shù)基本流程如圖1．

請回答：
（1）進(jìn)行過程①時，需用限制性核酸內(nèi)切酶酶切開載體以插入let-7基因．載體應(yīng)用RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為啟動子．
（2）進(jìn)行過程②時，需用胰蛋白酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)．
（3）研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響RAS的表達(dá)，其影響機理如圖2．據(jù)圖分析，可從細(xì)胞提取RNA進(jìn)行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉(zhuǎn)錄．肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中RAS蛋白（RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：
圖1表示利用基因工程技術(shù)將let一7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞的流程，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；②表示用胰蛋白酶處理組織細(xì)胞，使之成為單個細(xì)胞，再加細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程．
圖2表示let-7基因影響癌基因RAS的表達(dá)的原理，let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制．

解答 解：（1）過程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在該過程中需要用限制性核酸內(nèi)切酶對載體進(jìn)行切割，以便于目的基因的插入；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點，RNA聚合酶結(jié)合到該位點，可驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程．
（2）過程②表示動物細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個的細(xì)胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進(jìn)行傳代培養(yǎng)．
（3）判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來檢測，從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進(jìn)行雜交．根據(jù)題中信息“肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強，會引發(fā)肺癌”知，導(dǎo)入let-7基因后，肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制；據(jù)圖2可知，let-7基因影響RAS基因表達(dá)的機理是：let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制．
故答案為：
（1）限制性核酸內(nèi)切酶（或限制）啟動子
（2）胰蛋白
（3）RNA   RAS蛋白

點評 本題考查基因工程的原理和技術(shù)、遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟．要求能分析圖1，準(zhǔn)確判斷各過程的名稱；掌握遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)過程，并能利用圖2信息答題．