Question

13．番木瓜有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)用價(jià)值，但極易感染番木瓜環(huán)斑病毒（PRV）．科研人員通過(guò)現(xiàn)代生物技術(shù)大量培育抗病毒番木瓜并獲得其中的有效成分，請(qǐng)根據(jù)所學(xué)知識(shí)回答下列問(wèn)題：
（1）PRV是一種RNA病毒，科研人員提取該病毒的核酸，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄得到PRVCP基因（目的基因），利用目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體，其中的終止子能使轉(zhuǎn)錄過(guò)程在所需要的地方停下來(lái)．將目的基因?qū)�入番木瓜�?xì)胞時(shí)，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，該方法需將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，目的基因在番木瓜細(xì)胞中表達(dá)后，使受體細(xì)胞能有效抵抗PRV的侵染．
（2）要獲得抗PRV番木瓜植株，需在無(wú)菌的人工控制條件下，將受體細(xì)胞培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適宜條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株．
（3）為了檢測(cè)目的基因是否表達(dá)，需從轉(zhuǎn)基因番木瓜中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行檢測(cè)，該方法稱為抗原-抗體雜交法．
（4）上述生物技術(shù)包括轉(zhuǎn)基因技術(shù)和植物細(xì)胞工程中的植物組織培養(yǎng)技術(shù)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測(cè)與鑒定：
（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因工程的操作步驟中需要利用目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體，其中的終止子能使轉(zhuǎn)錄過(guò)程在所需要的地方停下來(lái)．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞時(shí)，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，該方法需將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，目的基因在番木瓜細(xì)胞中表達(dá)后，使受體細(xì)胞能有效抵抗PRV的侵染．
（2）要獲得抗PRV番木瓜植株，需要將番木瓜細(xì)胞培養(yǎng)成植株，即進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，該技術(shù)需在無(wú)菌的人工控制條件下，將受體細(xì)胞培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適宜條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株．
（3）為了檢測(cè)目的基因是否表達(dá)，需從轉(zhuǎn)基因番木瓜中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行檢測(cè)，該方法稱
抗原-抗體雜交法．
（4）上述生物技術(shù)包括轉(zhuǎn)基因技術(shù)和植物細(xì)胞工程中的植物組織培養(yǎng)技術(shù)．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體     轉(zhuǎn)錄   農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化    Ti質(zhì)粒
（2）無(wú)菌   愈傷組織
（3）抗原-抗體雜交      
（4）植物組織培養(yǎng)

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、植物細(xì)胞工程中的植物組織培養(yǎng)技術(shù)等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的工具及操作步驟；識(shí)記植物組織培養(yǎng)技術(shù)的過(guò)程和條件．