Question

19．廣西恭城縣盛產(chǎn)柿子，當(dāng)?shù)乜蒲行〗M開展了柿子酒、柿子醋生產(chǎn)的相關(guān)活動(dòng)．
（1）土壤中的酵母菌計(jì)數(shù)：
在秋季的柿子園中，落地的柿子流出果汁的周圍土壤中有酵母菌大量生長(zhǎng)繁殖．
①用滅過菌的小鐵鏟、信封取該處土樣、并在火焰旁稱取10g土樣，加入盛有90ml無菌水的錐形瓶中，充分搖勻．而后進(jìn)行系列稀釋操作；吸取錐形瓶中土壤液的上清液1ml，轉(zhuǎn)移至盛有9ml無菌水的大試管中充分搖勻，依次等比稀釋，獲得稀釋至10¹、10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀釋液．
②為測(cè)定土壤中酵母菌的數(shù)量，選用第①步中所獲得的10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀釋液，并依次分別吸取0.1ml進(jìn)行平板涂布操作．在適宜條件下培養(yǎng)，當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，對(duì)各稀釋度涂布的三個(gè)平板進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)（如表）．

序號(hào)	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ
稀釋度104倍	5	8	3
稀釋度103倍	178	191	156
稀釋度102倍	418	511	389

則每克土壤樣品中的酵母菌數(shù)量約為1.75×10⁷ 個(gè)．為使該實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)可靠，還應(yīng)該嚴(yán)格遵循對(duì)照原則，即同時(shí)在各稀釋度組中，另加一個(gè)接種同時(shí)在各稀釋度組中，另加一個(gè)平板接種無菌水作為對(duì)照的平板作為對(duì)照．
（2）柿子醋生產(chǎn)菌的制備：
為去掉酵母菌，挑取變酸的柿子酒內(nèi)的菌膜于30〜35℃進(jìn)行純化培養(yǎng)．
（3）柿子酒、柿子醋的制作（發(fā)酵裝置如圖所示）：
①可通過裝置中的出料口對(duì)發(fā)酵情況進(jìn)行及時(shí)監(jiān)測(cè)．此時(shí)，若采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)發(fā)酵液的酵母菌觀察計(jì)數(shù)，與（1）中計(jì)數(shù)方法相比，該計(jì)數(shù)方法測(cè)得的酵母菌數(shù)目較多．
②排氣口連接著一根長(zhǎng)而彎曲的膠管，在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出CO₂，同時(shí)還可以防止在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出C0₂，防止空氣中微生物的污染．

Answer 1

分析 1、從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．篩選目的菌的培養(yǎng)基應(yīng)該是選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基制作完成后進(jìn)行滅菌處理，所有操作應(yīng)該確保無菌操作．常用的固體培養(yǎng)基上的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法．
2、酵母菌在有氧和無氧的條件下都能生活：在有氧時(shí)，酵母菌大量繁殖，但是不起到發(fā)酵效果；在無氧時(shí)，繁殖速度減慢，但是此時(shí)可以進(jìn)行發(fā)酵．
3、醋酸菌好氧性細(xì)菌，當(dāng)缺少糖源時(shí)和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸；當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸．

解答 解：（1）①為了避免微生物的污染，用滅過菌的小鐵鏟、信封取該處土樣、并在火焰旁稱取10g土樣，加入盛有90ml無菌水的錐形瓶中，充分搖勻．
②由于一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，因此選擇“稀釋度10³倍”進(jìn)行計(jì)算，每克土壤樣品中的酵母菌數(shù)量約=（178+191+156）÷3÷0.1×10³×10²÷10=1.75×10⁷個(gè)．要使該實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)可靠，還應(yīng)該實(shí)施的操作是同時(shí)在各稀釋度組中，另加一個(gè)平板接種無菌水作為對(duì)照．
（2）醋酸菌生存的適宜溫度為30～35℃，因此為去掉酵母菌，挑取變酸的柿子酒內(nèi)的菌膜（醋酸菌）于30〜35℃進(jìn)行純化培養(yǎng)．
（3）①采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)發(fā)酵液的酵母菌觀察計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)的是活菌和死菌的數(shù)量，而稀釋涂布平板法只能統(tǒng)計(jì)活菌的數(shù)量．因此，與（1）中計(jì)數(shù)方法相比，該計(jì)數(shù)方法測(cè)得的酵母菌數(shù)目較多．
②排氣口彎管設(shè)置的目的是在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出C0₂，防止空氣中微生物的污染．
故答案為：
（1）①火焰     ②1.75×10⁷ 同時(shí)在各稀釋度組中，另加一個(gè)平板接種無菌水作為對(duì)照
（2）30〜35    
（3）①多
②在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出C0₂，防止空氣中微生物

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)以及果酒、果醋的制作，要求考生掌握微生物分離與純化的方法，掌握果酒、果醋制作的原理以及不同的環(huán)境條件，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題．