Question

3．B淋巴細(xì)胞瘤是一種惡性腫瘤，用常規(guī)手段治療時，會損傷大量的正常組織細(xì)胞，因此探索高效的治療手段已成為腫瘤治療領(lǐng)域需要迫切解決的熱點問題．
（1）B淋巴細(xì)胞瘤產(chǎn)生的根本原因是基因突變．正常機(jī)體通過特異性免疫中的細(xì)胞 免疫對腫瘤細(xì)胞發(fā)揮著免疫監(jiān)控和清除的作用，但由于各種原因，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞表面抗原表達(dá)量減少，無法被識別，從而成功躲避攻擊而快速增殖．
（2）實驗證實，CD19是B淋巴細(xì)胞瘤中特異性表達(dá)的一種抗原，在少數(shù)正常細(xì)胞，如B細(xì)胞、漿細(xì)胞中也有少量表達(dá)；CD28、CD137可激活T細(xì)胞，使其恢復(fù)增殖和抗腫瘤能力．科研人員利用動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合技術(shù)獲得的CD19單克隆抗體，與CD28、CD137組成嵌合抗原受體（CAR），結(jié)構(gòu)如圖1．請預(yù)測CAR在免疫應(yīng)答中的優(yōu)勢：CAR能夠在結(jié)合抗原CD19的同時激活T細(xì)胞，增強(qiáng)效應(yīng)T細(xì)胞對B淋巴細(xì)胞瘤的靶向殺傷能力．
（3）利用限制酶和DNA連接酶 酶將控制CD19單抗、CD28、CD137等合成的相關(guān)基因構(gòu)建成嵌合基因，并與作為運載體的病毒結(jié)合，導(dǎo)入到T細(xì)胞并整合到染色體DNA上，檢測到目的（嵌合）基因表達(dá)后，培養(yǎng)并獲得大量的嵌合抗原受體T細(xì)胞（CAR-T）．
（4）對CAR-T的抗腫瘤效果進(jìn)行檢測（如圖2）．

①選取裸鼠的原因是排除鼠自身T細(xì)胞對實驗結(jié)果的影響．
②B組注射適量的含有正常T細(xì)胞的PBS，D組注射等量含有CAR-T的PBS．
③實驗證實CAR-T細(xì)胞對小鼠體內(nèi)的腫瘤生長有明顯抑制作用，實驗結(jié)果應(yīng)為各組裸鼠的腫瘤體積大�。篋組＜C組≈B組＜A組．
（5）你認(rèn)為將CAR-T用于人類腫瘤治療，可能存在的風(fēng)險是人體內(nèi)正常B細(xì)胞、漿細(xì)胞數(shù)量減少，體液免疫能力減弱．

Answer 1

分析 1、細(xì)胞癌變是原癌基因和抑癌基因突變導(dǎo)致的．
2、單克隆抗體的制備過程運用了動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合技術(shù)．
3、分析題1：從圖中可見，A 區(qū)含 CD19 單抗，可特異性結(jié)合 B 淋巴細(xì)胞瘤表面的抗原 CD19，B 區(qū)含 CD28、CD137，可激活 T 細(xì)胞；所以該嵌合體抗原受體 CAR 的優(yōu)勢是既能通過結(jié)合 CD19 特異性識別 B 淋巴細(xì)胞瘤，又能激活 T 細(xì)胞產(chǎn)生效應(yīng) T 細(xì)胞，增強(qiáng)了效應(yīng) T 細(xì)胞定向殺傷 B 淋巴細(xì)胞瘤的能力．
4、分析圖2：要檢測 CAR-T（嵌合抗原受體 T 細(xì)胞）的效果，最好沒有其他 T 細(xì)胞的干擾，而裸鼠體內(nèi)不能產(chǎn)生 T 細(xì)胞，所以選取裸鼠的原因就是為了排除鼠自身 T 細(xì)胞對實驗結(jié)果的影響：；要檢測 CAR-T 的效果，D 組（實驗組）中就應(yīng)注射等量含 CAR-T 的 PBS．實驗中 C 組的 T 細(xì)胞中轉(zhuǎn)入了空載體，D 組 T 細(xì)胞中轉(zhuǎn)入了連有嵌合基因的載體，那么在邏輯上要確認(rèn)實驗結(jié)果是由嵌合基因表達(dá)產(chǎn)物造成的，還需要排除導(dǎo)入載體的過程對實驗結(jié)果的影響，所以 B 組就應(yīng)該注射等量的未轉(zhuǎn)入載體的正常 T 細(xì)胞的PBS

解答 解：（1）細(xì)胞癌變是原癌基因和抑癌基因突變導(dǎo)致的，人體在清除癌細(xì)胞時依賴細(xì)胞免疫．效應(yīng) T 細(xì)胞無法識別腫瘤細(xì)胞，說明腫瘤細(xì)胞膜表面抗原減少．
（2）在制備單克隆抗體時，通常需要使用動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合技術(shù)．從圖中可見，A 區(qū)含 CD19 單抗，可特異性結(jié)合 B 淋巴細(xì)胞瘤表面的抗原 CD19，B 區(qū)含 CD28、CD137，可激活 T 細(xì)胞；所以該嵌合體抗原受體 CAR 的優(yōu)勢是既能通過結(jié)合 CD19 特異性識別 B 淋巴細(xì)胞瘤，又能激活 T 細(xì)胞產(chǎn)生效應(yīng) T 細(xì)胞，增強(qiáng)了效應(yīng) T 細(xì)胞定向殺傷 B 淋巴細(xì)胞瘤的能力．
（3）構(gòu)建嵌合基因需要將 CD19 單抗基因和 CD28 基因、CD137 基因整合在一起，所以需要限制酶切割，又需要 DNA 連接酶連接．目的基因?qū)�入到受體細(xì)胞時需要運載體，此處選擇的運載體是動物病毒．由于目的基因?qū)�入后需要能在受體細(xì)胞穩(wěn)定存在并表達(dá)，所以需要讓目的基因整合到細(xì)胞本身的染色體 DNA 上，其實質(zhì)粒也可以保證穩(wěn)定存在并表達(dá)，但此處并沒有用質(zhì)粒作運載體．
（4）①由于要檢測 CAR-T（嵌合抗原受體 T 細(xì)胞）的效果，最好沒有其他 T 細(xì)胞的干擾，而裸鼠體內(nèi)不能產(chǎn)生 T 細(xì)胞，所以選取裸鼠的原因就是為了排除鼠自身 T 細(xì)胞對實驗結(jié)果的影響．
②由于要檢測 CAR-T 的效果，D 組（實驗組）中就應(yīng)注射等量含 CAR-T 的 PBS．實驗中 C 組的 T 細(xì)胞中轉(zhuǎn)入了空載體，D 組 T 細(xì)胞中轉(zhuǎn)入了連有嵌合基因的載體，那么在邏輯上要確認(rèn)實驗結(jié)果是由嵌合基因表達(dá)產(chǎn)物造成的，還需要排除導(dǎo)入載體的過程對實驗結(jié)果的影響，所以 B 組就應(yīng)該注射等量的未轉(zhuǎn)入載體的正常 T 細(xì)胞的PBS．
③要得到“CAR-T 對小鼠體內(nèi)的腫瘤生長有明顯抑制作用”的結(jié)論，那么預(yù)期的實驗結(jié)果就是 D 組裸鼠的腫瘤體積最�。�
（5）由于 CD19 抗原在少數(shù)正常細(xì)胞，如 B 細(xì)胞、漿細(xì)胞中也有少量表達(dá)，所以在使用 CAR-T 治療時，也有可能殺傷正常 B 細(xì)胞、漿細(xì)胞，導(dǎo)致體液免疫能力減弱．
故答案為：
（1）基因突變  細(xì)胞  減少
（2）動物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞融合    CAR 能夠在結(jié)合抗原 CD19 的同時激活 T 細(xì)胞，增強(qiáng)效應(yīng) T 細(xì)胞對 B 淋巴細(xì)胞瘤的靶向殺傷能力
（3）限制酶和 DNA 連接酶運載體    染色體 DNA
（4）①排除鼠自身 T 細(xì)胞對實驗結(jié)果的影響
②含有正常 T 細(xì)胞的 PBS   含有 CAR-T 的 PBS
③各組裸鼠的腫瘤體積大�。篋 組＜C 組≈B 組＜A 組

點評 本題主要考查了癌細(xì)胞產(chǎn)生的原因，機(jī)體的免疫，對CAR-T的抗腫瘤效果進(jìn)行檢測，意在考查考生的審圖能力，根據(jù)實驗?zāi)康墨@取有效信息的能力，屬于中等難度試題．