Question

綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來，一直作為一個監(jiān)測完整細胞和組織內(nèi)基因表達及蛋白質(zhì)位置的理想標記．請根據(jù)圖表回答下列問題．

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是-TCGA-，N端伸出的核苷酸的堿基序列是-TGCA-，則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時，應選用限制酶

 

和

 

，再對

 

進行切割．
（2）若對符合設計要求的重組質(zhì)粒A進行酶切，假設所用的酶均可將識別位點完全切開，請根據(jù)圖表中的信息分析，若采用BamHⅠ和PstⅠ酶切，可得到

 

種DNA片段．
（3）檢測GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上，可在熒光顯微鏡下觀察GFP的表達，圖中綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的轉(zhuǎn)基因操作中的GFP既是

 

，也是

 

．
（4）過程④將重組質(zhì)粒A導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是

 

．
（5）綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程中涉及到多項現(xiàn)代生物技術(shù)，圖中⑤⑥⑦過程屬于

 

．⑧過程屬于

 

，在使用合成培養(yǎng)基時，通常加入

 

等一些天然成分．
（6）目前科學家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：

 

（用數(shù)字序號表示）．
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸；
②藍色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設計序列；
③藍色熒光蛋白基因的修飾（合成）；
④表達出藍色熒光蛋白．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù),動物細胞與組織培養(yǎng)過程

專題：

分析：據(jù)圖分析，①表示獲取目的基因，②表示用限制酶切割質(zhì)粒，③表示基因表達載體的構(gòu)建，④表示將目的基因?qū)�入受體細胞，⑤表示將豬胎兒成纖維細胞提取細胞核，⑥表示將豬卵母細胞去除細胞核，⑦表示核移植，⑧表示動物細胞培養(yǎng)，⑨表示胚胎移植．

解答： 解：（1）從圖示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位點；N端伸出的核苷酸的堿基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位點；則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時，應選用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，再用DNA連接酶把目的基因和運載體相連．
（2）PstI可將重組質(zhì)粒的N端切開，而BamHⅠ能在重組質(zhì)粒的黑色部分切開，這樣就得到2種DNA．
（3）據(jù)圖解，可知最終要得到綠色熒光豬，因此GFP是目的基因，由于GFP能合成綠色熒光蛋白，可據(jù)此檢測GFP是否成功導入細胞，作為標記基因．
（4）將重組質(zhì)粒A導入豬胎兒成纖維細胞時，采用顯微注射法．
（5）綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程中涉及到基因工程、核移植和胚胎移植，圖中⑤⑥⑦過程屬于核移植技術(shù)．．⑧過程屬于動物細胞培養(yǎng)，在使用合成培養(yǎng)基時，通常加入血清、血漿 等一些天然成分．
（6）蛋白質(zhì)工程的基本途徑是：從預期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)（②）→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列（①）→相應基因的修飾改造或人工合成（③）→相應的表達（④）．
故答案為：
（1）HindⅢPstⅠTi質(zhì)粒   
（2）2   
（3）目的基因   標記基因   
（4）顯微注射技術(shù)   
（5）核移植   動物細胞培養(yǎng)   血清、血漿   
（6）②①③④

點評：本題考查基因工程、蛋白質(zhì)工程、動物細胞培養(yǎng)等的相關(guān)知識，意在考查學生識圖和理解能力，屬于中檔題．