Question

18．如圖是轉(zhuǎn)基因抗蟲棉花的培育過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖分析回答問題：

注：①HindⅢ，BamHⅠ、SalⅠ為限制酶，識(shí)別的序列分別為-A↓AGCTT-、-G↓GATCC-、-G↓TCGAC-．
②影印培養(yǎng)法是一種類似“蓋章”的接種方法．用滅菌的絲絨布制成的“印章”將培養(yǎng)基A上菌落中的細(xì)菌接種到培養(yǎng)基B的相同位置上，待培養(yǎng)一段時(shí)間后，將兩種培養(yǎng)基的相同位置上的菌落做對(duì)比．
（1）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用限制酶SalⅠ和HindⅢ對(duì)目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行切割．以保證重組DNA的序列是唯一的．
（2）用影印培養(yǎng)法是為了篩選出導(dǎo)入了目的基因的農(nóng)桿菌，培養(yǎng)基A和B在成分上的區(qū)別是抗生素種類不同，培養(yǎng)基A中是氨芐青霉素，培養(yǎng)基B中是四環(huán)素．應(yīng)選擇菌落4和6中的農(nóng)桿菌將抗蟲基因?qū)�入棉花�?xì)胞．將農(nóng)桿菌接種到培養(yǎng)基A上所使用的方法是稀釋涂布平板法．
（3）愈傷組織形成后一般要將其先轉(zhuǎn)接到叢芽（填“生根”或“叢芽”）培養(yǎng)基上．
（4）經(jīng)抗蟲接種實(shí)驗(yàn)從培養(yǎng)出的棉花植株中篩選出抗蟲個(gè)體，可利用PCR技術(shù)快速獲得大量抗蟲基因，用于擴(kuò)增的引物應(yīng)選擇下網(wǎng)中的a和d．

Answer 1

分析 分析題圖：質(zhì)粒和含抗蟲基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制性核酸內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)．
在質(zhì)粒上，這三種限制酶的切割位點(diǎn)都位于抗四環(huán)素基因上，用其任何一種酶都會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因；在含抗蟲基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割會(huì)破壞目的基因．

解答 解：（1）要保證重組DNA的序列是唯一的，且防止自身環(huán)化，應(yīng)選用兩種限制酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，且不能破壞目的基因，故只能選用限制酶SalⅠ和HindⅢ．
（2）導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌中有氨芐青霉素抗性無四環(huán)素抗性，導(dǎo)人了質(zhì)粒的農(nóng)桿菌中既有氨芐青霉素抗性也有四環(huán)素抗性，根據(jù)這個(gè)特點(diǎn)應(yīng)先將農(nóng)桿菌涂布在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基（A）表面，長出的菌落中農(nóng)桿菌含重組質(zhì)�；蛸|(zhì)粒，再通過影印培養(yǎng)，將這些菌落中的細(xì)菌接種到含四環(huán)素培養(yǎng)基（B）的相同位置上，待培養(yǎng)一段時(shí)間后，將這兩種培養(yǎng)基的相同位置上菌落做對(duì)比，在培養(yǎng)基A上出現(xiàn)、在培養(yǎng)基B上不出現(xiàn)的菌落中農(nóng)桿菌是導(dǎo)人了重組質(zhì)粒的．
（3）愈傷組織形成后一般要將其先轉(zhuǎn)接到叢芽培養(yǎng)基上，因叢芽能進(jìn)行光合作用且能合成生長素，有利于生根．
（4）DNA復(fù)制過程中，子鏈的延伸端為3a'端，因此只能選擇引物對(duì)a和d，才能通過PCR技術(shù)獲得大量抗蟲基因．
故答案為：
（1）SalⅠ和HindⅢ
（2）抗生素種類不同，培養(yǎng)基A中是氨芐青霉素，培養(yǎng)基B中是四環(huán)素   4和6   稀釋涂布平板法
（3）叢芽
（4）a和d

點(diǎn)評(píng) 本題以轉(zhuǎn)基因抗蟲棉花的培育為素材，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的理解能力、識(shí)記能力和應(yīng)用能力．