Question

2．草甘膦是一種廣譜除草劑，其除草機(jī)制是抑制植物體內(nèi)EPSPS酶的合成，最終導(dǎo)致植物死亡．但是，它的使用有時也會影響到植物的正常生長．目前，已發(fā)現(xiàn)可以從一種抗草甘膦的大腸桿菌突變株中分離出EPSPS基因，若將該基因轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞內(nèi)，從而獲得的轉(zhuǎn)基因植物就能耐受高濃度的草甘膦．
取6株植物，其中，植物A和D對草甘膦敏感，B和E對草甘膦天然具有抗性，C和F則經(jīng)過了轉(zhuǎn)基因處理，但是否成功還未知．圖1為4種限制酶的識別序列和酶切位點(diǎn)，圖2為含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切點(diǎn)．據(jù)圖回答下列問題：

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmpⅠ
酶切位點(diǎn)	C↓CGG GGC↑C	G↓GATCC CCTAG↑G	↓GATC CTAG↑	CCC↓GGG GGG↑CCC

（1）若A-C澆清水，D-F澆的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成長的是ABCE．
（2）若要從大腸桿菌中篩選出含EPSPS基因的突變菌株甲，在大腸桿菌培養(yǎng)基中還必須加入草甘膦．
（3）一個完整的基因表達(dá)載體除了具備復(fù)制原點(diǎn)、啟動子和終止子外，還應(yīng)包括標(biāo)記基因和目的基因．
（4）若需利用酶切法獲得目的基因，最應(yīng)選擇的限制酶是MspⅠ和SmaⅠ．
（5）通常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將EPSPS基因?qū)�入植物體內(nèi)．假設(shè)EPSPS基因已被成功轉(zhuǎn)移到植物F中，但植物F仍沒有表現(xiàn)出抗性，分析可能的原因目的基因沒有成功表達(dá)或表達(dá)的產(chǎn)物失活．

Answer 1

分析 分析表格：表中是四種限制酶的識別序列和切割位點(diǎn)，其中BamHⅠ的識別序列也能被MboⅠ識別和切割．
分析圖2：用BamHⅠ切割會破壞目的基因，用MboⅠ切割也會破壞目的基因，因此要用酶切法獲得目的基因，最應(yīng)選擇的限制酶是MspⅠ和SmaⅠ．

解答 解：（1）植物A和D對草甘膦敏感，B和E對草甘膦天然具有抗性，C和F則經(jīng)過了轉(zhuǎn)基因處理，所以A-C澆清水，都能健康成長；F雖經(jīng)過了轉(zhuǎn)基因處理，但是否成功還未知，所以D-F澆的水中含有草甘膦，D肯定不能健康成長，E肯定能健康成長，F(xiàn)未知．因此，肯定能健康成長的是ABCE．
（2）要從大腸桿菌中篩選出含EPSPS基因的突變菌株，則必須要用含草甘膦的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌．
（3）基因表達(dá)載體的組成包括復(fù)制原點(diǎn)、啟動子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因．
（4）用BamHⅠ切割會破壞目的基因，用MboⅠ切割也會破壞目的基因，因此要用酶切法獲得目的基因，最應(yīng)選擇的限制酶是MspⅠ和SmaⅠ，這樣既可獲得目的基因，也可以防止目的基因與運(yùn)載體反向鏈接．
（5）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．若EPSPS基因已被成功轉(zhuǎn)移到植物F中，但植物F仍沒有表現(xiàn)出抗性，可能的原因目的基因沒有成功表達(dá)或表達(dá)的產(chǎn)物失活．
故答案為：
（1）ABCE     
（2）草甘膦   
（3）標(biāo)記基因  目的基因   
（4）MspⅠSmaⅠ
（5）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法   目的基因沒有成功表達(dá)或表達(dá)的產(chǎn)物失活

點(diǎn)評 本題結(jié)合圖表，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)問題，能結(jié)合圖中和表中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．