Question

20．如圖為利用人成纖維細(xì)胞（具分裂能力、能在HAT培養(yǎng)基上存活）和小鼠骨髓瘤細(xì)胞（具分裂能力、不能在HAT培養(yǎng)基上存活）進(jìn)行人類基因定位的操作示意圖，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題．

（1）圖示方法是動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用，該技術(shù)的基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)．
（2）操作所用的成纖維細(xì)胞應(yīng)傳代10代以內(nèi)，誘導(dǎo)融合時(shí)需要加入的促融劑是PEG（或滅活病毒）．
（3）人、鼠細(xì)胞先經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜融合形成，再經(jīng)過(guò)一次多（雙）核細(xì)胞有絲分裂，形成單核細(xì)胞．
（4）HAT培養(yǎng)基起選擇培養(yǎng)作用，培養(yǎng)時(shí)溫度應(yīng)為36.5±0.5℃，操作中加入烏本苷的目的是除去成纖維細(xì)胞．
（5）下表所示為雜交細(xì)胞A、B、C、D中存在的人類染色體及人類特有的4種酶（+表示存在，-表示不存在），這4種酶均為單基因編碼產(chǎn)生，據(jù)表推斷，編碼酶Ⅰ的基因位于1染色體上，編碼酶Ⅱ和Ⅳ的基因位于染色體2上．

雜交細(xì)胞	酶				人類染色體
	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	1	2	3
A	-	+	+	+	-	+	-
B	+	-	+	-	+	-	-
C	-	-	-	-	-	-	+
D	+	+	-	+	+	+	+

Answer 1

分析 1、分析題圖：圖示為利用人成纖維細(xì)胞（具分裂能力、能在HAT培養(yǎng)基上存活）和小鼠骨髓瘤細(xì)胞（具分裂能力、不能在HAT培養(yǎng)基上存活）進(jìn)行人類基因定位的操作示意圖，成纖維細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞在促融劑的作用下形成三種雜交細(xì)胞，即成纖維細(xì)胞自身融合細(xì)胞、小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞和雜交細(xì)胞；在HAT培養(yǎng)基上篩選出成纖維細(xì)胞自身融合細(xì)胞和雜交細(xì)胞；加人鳥本苷的目的是除去成纖維細(xì)胞，留下雜交細(xì)胞．
2、分析表格：雜交細(xì)胞A中存在2號(hào)染色體，表達(dá)出酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ；雜交細(xì)胞B存在1號(hào)染色體，表達(dá)出酶Ⅰ、Ⅲ；雜交C存在3號(hào)染色體，不能表達(dá)出這四種酶；雜交細(xì)胞D存在1、2和3號(hào)染色體，表達(dá)出酶表達(dá)出酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ．

解答 解：（1）由圖分析，該過(guò)程為動(dòng)物細(xì)胞融合，其基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)．
（2）目前使用的正常細(xì)胞通常為10代以內(nèi)的，因?yàn)?0代以內(nèi)的細(xì)胞可以保持細(xì)胞正常的二倍體核型．誘導(dǎo)兩個(gè)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法：物理（離心、振動(dòng)、電刺激）、化學(xué)（PEG）、生物誘導(dǎo)（滅活的病毒）．
（3）人、鼠細(xì)胞先經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜融合形成多核細(xì)胞，經(jīng)過(guò)一次有絲分裂，形成單核細(xì)胞．
（4）據(jù)題干信息，人成纖維細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基上存活，而小鼠骨髓瘤細(xì)胞不能在HAT培養(yǎng)基上存活，則HAT培養(yǎng)基起選擇培養(yǎng)作用，篩選出人成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞融合的雜交細(xì)胞；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜溫度為36.5±0.5℃；由圖可知，操作中加人鳥本苷的目的是除去成纖維細(xì)胞，篩選出雜交細(xì)胞．
（5）雜交細(xì)胞B只存在1號(hào)染色體，其表達(dá)出酶Ⅰ、Ⅲ，說(shuō)明編碼酶Ⅰ的基因位于1號(hào)染色體上；雜交細(xì)胞A中只存在2號(hào)染色體，但表達(dá)出酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，而雜交細(xì)胞B只存在1號(hào)染色體，也能表達(dá)出酶Ⅲ，說(shuō)明編碼酶Ⅱ和Ⅳ的基因位于2號(hào)染色體上．
故答案為：
（1）動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
（2）10 PEG（或滅活病毒）
（3）多（雙）核細(xì)胞有絲分裂
（4）選擇 36.5±0.5 除去成纖維細(xì)胞
（5）1Ⅱ和Ⅳ

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖標(biāo)，考查動(dòng)物細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程及條件；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞融合的手段及其應(yīng)用，能結(jié)合圖中和表中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．