Question

人和哺乳動物的尿液中含有尿素，大量尿素的存在會對環(huán)境造成污染．土壤中有些細菌含有可降解尿素的脲酶．如圖是某同學從土壤中篩選能降解尿素菌株的實驗流程．請回答相關(guān)問題：
配置土壤溶液→系列稀釋→涂布平板與培養(yǎng)→菌落計數(shù)
（1）用以

 

為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選能分泌脲酶的細菌．從功能上講，該培養(yǎng)基屬于

 

培養(yǎng)基．培養(yǎng)細菌時必須在

 

條件下操作．對培養(yǎng)基滅菌的常用方法是

 

．
（2）采用

 

法時需要將樣液進行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)、菌落計數(shù)．在稀釋土壤溶液的過程中每步都要在

 

旁進行操作．將接種后的培養(yǎng)皿至于37℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)，將平板倒置培養(yǎng)的目的是

 

．在接種前需要檢測使用的培養(yǎng)基是否被污染，方法是

 

．
（3）向培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若培養(yǎng)基中存在可合成脲酶的細菌，其茵落周圍會出現(xiàn)紅色，這是尿素被分解產(chǎn)生的

 

使酚紅指示劑顯色的結(jié)果．變色區(qū)域越大，表明該菌株降解尿素的能力

 

．

Answer 1

考點：培養(yǎng)基對微生物的選擇作用,微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：1、利用該分離對象對某一營養(yǎng)物質(zhì)的“嗜好”，專門在培養(yǎng)基中加入該營養(yǎng)物質(zhì)，使該微生物大量增殖．這些物質(zhì)主要是一些特殊的碳源、氮源，如纖維素可用來富集纖維素分解微生物，尿素可用來富集尿素分解微生物．
2、稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞．計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)．經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)．
3、尿素被分解尿素的菌氧化成氨氣，氨氣會使培養(yǎng)基堿性增強，PH升高，指示劑酚紅變紅，因此以通過在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，檢測培養(yǎng)基pH的變化來判斷尿素是否被分解．

解答： 解：（1）用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選能分泌脲酶的細菌．從功能上講，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．培養(yǎng)細菌時必須在無菌條件下操作．對培養(yǎng)基滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌法．
（2）采用稀釋涂布平板法時需要將樣液進行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)、菌落計數(shù)．在稀釋土壤溶液的過程中每步都要在 酒精燈火焰旁進行操作．將接種后的培養(yǎng)皿至于37℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)，將平板倒置培養(yǎng)的目的是防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染．在接種前需要檢測使用的培養(yǎng)基是否被污染，方法是將未接種的含培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿放在37℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)，觀察是否有菌落形成．
（3）向培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若培養(yǎng)基中存在可合成脲酶的細菌，其茵落周圍會出現(xiàn)紅色，這是尿素被分解產(chǎn)生的 氨使酚紅指示劑顯色的結(jié)果．變色區(qū)域越大，表明該菌株降解尿素的能力越強．
故答案為：
（1）尿素    選擇    無菌    高壓蒸汽滅菌法
（2）稀釋涂布平板   酒精燈火焰   防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染
將未接種的含培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿放在37℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)，觀察是否有菌落形成
（3）氨   越強

點評：本題以脲酶為素材，考查微生物的分離和培養(yǎng)、以氮素為氮源測定能生長的細菌的數(shù)量，要求考生識記無菌技術(shù)，特別是實驗室常用的消毒和滅菌方法；掌握培養(yǎng)基的種類，能應(yīng)用相應(yīng)的培養(yǎng)基對土壤中的含有脲酶的細菌進行分離．