Question

2．人外周血單核細(xì)胞能合成白介素2 （Ⅱ-2），該蛋白可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，但在體內(nèi)易被降解D研究人員將Ⅱ-2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個(gè)融合基因，并在酵母菌中表達(dá)，獲得具有Ⅱ-2生理功能、且不易降解的Ⅱ-2-HSA融合蛋白．其技術(shù)流程如圖．請回答：
（1）培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞時(shí)，需要將溫度控制在37⁰C，此外還需要通入O₂和CO₂ （氣體）；圖中②表示逆轉(zhuǎn)錄過程．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)能夠催化磷酸二酯鍵斷裂的工具酶是限制酶；構(gòu)建好的基因表達(dá)載體必須具備啟動(dòng)子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因等結(jié)構(gòu)，才能在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)．
（3）基因表達(dá)載體1中的位點(diǎn)a應(yīng)為限制酶BglⅡ的識(shí)別位點(diǎn)，才能成功構(gòu)建表達(dá)載體2．
（4）基因表達(dá)載體2導(dǎo)人酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL一2對(duì)應(yīng)的堿基序列不能含有終止（填“起始”或“終止”）密碼子，才能成功表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白．
（5）應(yīng)用抗原-抗體雜交技術(shù)可檢測酵母菌是否表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：①表示轉(zhuǎn)錄提取信使RNA，②表示逆轉(zhuǎn)錄形成目的基因，③表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建．
限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因．
胚胎移植中受體的子宮不對(duì)外來胚胎發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能．對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育．

解答 解：（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所需要的條件是：95%空氣和5%CO₂氣體環(huán)境、適宜溫度（37℃）和pH、無毒無菌的環(huán)境及合適的營養(yǎng)成分，其培養(yǎng)基中通常需加入血清、血漿等一些天然成分；圖中②mRNA→cDNA，表示逆轉(zhuǎn)錄過程．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)先用限制酶切割讓質(zhì)粒和目的基因的磷酸二酯鍵獲得相同的黏性末端，然后在DNA連接酶的作用下重新組合：基因表達(dá)載體必須具備啟動(dòng)子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因等結(jié)構(gòu)．
（3）根據(jù)目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點(diǎn)分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達(dá)載體1也必須有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，表達(dá)載體1上已有EcoRⅠ，推測位點(diǎn)a應(yīng)含有BglⅡ．
（4）基因表達(dá)載體2導(dǎo)人酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL一2對(duì)應(yīng)的堿基序列不能含有終止密碼子，才能成功表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白．
（5）檢測酵母菌是否表達(dá)出IL-2-HSA融合蛋白可用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）37    O₂和CO₂   逆轉(zhuǎn)錄
（2）限制酶    終止子、標(biāo)記基因
（3）a
（4）終止
（5）抗原-抗體

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件；識(shí)記基因表達(dá)載體的組成；明確啟動(dòng)子和終止子的功能；識(shí)記目的基因分子水平檢測的方法等．