Question

19．絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒（TMV）基因，可以合成一種抗TMV蛋白，葉片對(duì)TMV具有抗感染性．煙草是重要的經(jīng)濟(jì)作物，由于TMV的感染會(huì)導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)．研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV的煙草，主要流程如圖所示，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題．

（1）科學(xué)家首先從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV基因轉(zhuǎn)錄的RNA，然后合成目的基因．圖中過程①表示反轉(zhuǎn)錄，獲得的DNA必須在兩側(cè)添加啟動(dòng)子和終止子，還要添加限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別切割的堿基序列．
（2）由圖分析，在過程③構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）在過程⑤培養(yǎng)基中需要添加卡那霉素、植物必需的各種營養(yǎng)成分和植物激素，以保證受體細(xì)胞能培養(yǎng)成再生植株．其中過程⑤添加卡那霉素的作用是篩選含有目的基因的重組質(zhì)粒．
（4）在個(gè)體水平的鑒定過程中，可通過接種煙草花葉病毒的方法來確定植株是否具有抗性．

Answer 1

分析 由圖可知，①是逆轉(zhuǎn)錄過程，③是構(gòu)建基因表達(dá)載體，④是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．⑤是目的基因的檢測(cè)與鑒定，⑥是植物組織培養(yǎng)過程，據(jù)此答題．

解答 解：（1）過程①表示獲得的目的基因，是RNA通過逆轉(zhuǎn)錄獲得DNA，該DNA兩側(cè)應(yīng)含有相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，兩端還必須有啟動(dòng)子和終止子．
（2）由圖分析，⑤過程在含有卡那霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，說明構(gòu)建的重組質(zhì)粒上含有的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因．目的基因?qū)�入植物體細(xì)胞的方法常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）過程⑤添加卡那霉素的作用是篩選含有目的基因的重組質(zhì)粒．
（4）過程⑥需要對(duì)表達(dá)的產(chǎn)生進(jìn)行鑒定，可采取抗原-抗體雜交，若從個(gè)體水平鑒定，可通過接種煙草花葉病毒的方法來確定植株是否具有抗性．
故答案為：
（1）反轉(zhuǎn)錄 啟動(dòng)子 限制性核酸內(nèi)切
（2）卡那霉素抗性 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（3）篩選含有目的基因的重組質(zhì)粒
（4）接種煙草花葉病毒

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程和植物組織培養(yǎng)，理解基因工程培育轉(zhuǎn)基因植物過程是解題的關(guān)鍵．