Question

紅細(xì)胞生成素（EPO）是體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病由于天然EP0來(lái)源極為有限，目前臨床使用的紅細(xì)胞生成素主要來(lái)自于基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人紅細(xì)胞生成素（rhEPO）期間要生產(chǎn)流程如圖
（1）圖中①所指的是

 

技術(shù)．
（2）圖中②所指的物質(zhì)是

 

，③所指的物質(zhì)是

 

．
（3）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生

 

末端．若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生

 

（相同，不同）粘性末端的限制酶．
（4）構(gòu)建的表達(dá)載體含有人EP0基因及其啟動(dòng)子、

 

、

 

等，其中啟動(dòng)子是

 

酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)．
（5）為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為

 

．
（6）將構(gòu)建好的基因表達(dá)載體導(dǎo)入中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞系常采用

 

法．如果要將某目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的

 

中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過(guò)DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的

 

上．
（7）檢測(cè) rhEPO的活性需用抗rhEPO單克隆抗體．分泌單克隆抗體的

 

細(xì)胞，可由rhEPO免疫過(guò)的小鼠B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合而成單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是

 

并可大量制備．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),單克隆抗體的制備過(guò)程

專題：

分析：據(jù)圖分析可知：①和②過(guò)程都是獲取目的基因的途徑，①是利用PCR技術(shù)短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增目的基因，②是通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法獲取目的基因．獲得此圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組人工紅細(xì)胞生成素（rhEPO）期間要生產(chǎn)流程，最終產(chǎn)物是紅細(xì)胞生成素（rhEPO），由此可推測(cè)出圖中高效表達(dá)出③的重組CHO細(xì)胞是高效表達(dá)出紅細(xì)胞生成素（rhEPO）的重組細(xì)胞．

解答： 解：（1）由圖可知：①過(guò)程是PCR擴(kuò)增目的基因技術(shù)．PCR擴(kuò)增技術(shù)是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，可以在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因．
（2）②過(guò)程是以反轉(zhuǎn)錄法獲取目的基因，反轉(zhuǎn)錄法是以mRNA為模板，以脫氧核糖核苷酸為原料在酶的催化下生成DNA的過(guò)程．是一種人工合成目的基因的方法．由圖可知最終產(chǎn)物是rhEPO，由此可推知，③是rhEPO．
（3）用不同的限制酶切割可形成黏性末端，也能形成平末端，用DNA連接酶連接時(shí)，需要相同的黏性末端，所以限制酶選擇時(shí)應(yīng)選擇產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶．
（4）基因表達(dá)載體由啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因組成．啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位．
（5）檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，方法是用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交．既分子雜交技術(shù)．
（6）目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法，目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，利用農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上．
（7）單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生，單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高并可大量制備．
故答案為：
（1）PCR  
（2）mRNA    rhEPO
（3）平   相同
（4）終止子   標(biāo)記基因    RNA聚合酶
（5）分子雜交技術(shù)
（6）顯微注射   T-DNA   染色體的DNA
（7）雜交瘤    特異性強(qiáng)、靈敏度高

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程和單克隆抗體，意在考查考生能從課外材料中獲取相關(guān)的生物學(xué)信息，并能運(yùn)用這些信息，結(jié)合所學(xué)知識(shí)解決相關(guān)的生物學(xué)問(wèn)題．