Question

苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在若降解苯酚的微生物．某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，所以人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品，請(qǐng)回答下列問題：

（1）②中培養(yǎng)菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加

 

作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基

 

（A．影響；B．不影響）細(xì)菌的數(shù)量，如果要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用

 

法．
（2）④為對(duì)照、微生物在④中不生長、在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于

 

；使用

 

法可以在⑥上獲得單菌落．采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)？

 

（3）如何比較不同菌株降解苯酚能力的大�。�

 

（4）實(shí)驗(yàn)過程中如何防止其它微生物的污染？

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用,微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：（1）本題考查細(xì)菌的分離技術(shù)．題目中所篩選的細(xì)菌“只能”降解苯酚，故可采用以苯酚為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基篩選，含除苯酚外其他碳源的培養(yǎng)基作為對(duì)照．培養(yǎng)液中苯酚濃度下降的速度可反映該菌對(duì)苯酚的降解能力，嚴(yán)格滅菌、無菌操作可有效防止實(shí)驗(yàn)過程中的雜菌污染．
（2）測(cè)定微生物數(shù)量的方法：
①直接計(jì)數(shù)法：常用顯微鏡直接技術(shù)法，一般適用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細(xì)胞菌體的計(jì)數(shù)．
②間接計(jì)數(shù)法：常用稀釋平板計(jì)數(shù)法，平板培養(yǎng)基上長出一個(gè)菌落就代表原待測(cè)樣品中一個(gè)微生物個(gè)體．

解答： 解：（1）選擇分解苯酚的菌的培養(yǎng)基是以苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)基；苯酚是唯一的碳源，當(dāng)苯酚消耗盡時(shí)，菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)繁殖，所以②中不同濃度的碳源A影響細(xì)菌數(shù)量；一般采用稀釋涂布平板法來測(cè)定②中活菌數(shù)目．
（2）④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源，⑤培養(yǎng)基的中加入苯酚作為碳源；使用釋涂布平板法或平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落．采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基．
（3）取5支潔凈培養(yǎng)瓶→分別加入相同培養(yǎng)基加等量的苯酚，→分別接種5種等量的來自不同菌株的菌種→在相同的適宜條件下培養(yǎng)相同時(shí)間→再檢測(cè)這5支瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的苯酚的含量，從而比較不同菌株降解苯酚能力的大�。�
（4）從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過程要無菌操作：無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵：a．實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和和消毒；
b．將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；
c．為避免周圍環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；
d．實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸．
故答案為：
（1）苯酚　A　平板菌落計(jì)數(shù)（活菌計(jì)數(shù)或菌落計(jì)數(shù)）
（2）④含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚為唯一碳源　平板分離（稀釋涂布平板或平板劃線分離）　避免培養(yǎng)過程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長
（3）用同樣苯酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同菌株，一定時(shí)間后，測(cè)定培養(yǎng)液中苯酚含量
（4）培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程無菌操作

點(diǎn)評(píng)：本題綜合微生物的培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和分析能力，意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)與觀點(diǎn)，對(duì)某些生物學(xué)問題進(jìn)行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論的能力；對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和結(jié)果進(jìn)行解釋、分析、處理的能力．