Question

20．RT-PCR是將mRNA逆轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)相結(jié)合的技術(shù)，具體過程如圖所示，請回答：

（1）過程①需要加入緩沖液、原料、RNA提取物、逆轉(zhuǎn)錄酶 和引物A等．
（2）過程②首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活、使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開（答對一點(diǎn)即得分），該反應(yīng)體系中所用的TaqDNA聚合酶至少應(yīng)能耐受95℃℃高溫．
（3）決定RT-PCR擴(kuò)增片段的是引物，要對圖中單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上至少需要2ⁿ-1個引物B．
（4）利用RT-PCR技術(shù)可用于對某些微量RNA病毒的檢測，并可提高檢測的靈敏度，原因是增加了待測RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測．
（5）RT-PCR過程中主要通過對溫度的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)高效有序地進(jìn)行．

Answer 1

分析 1、分析圖示，過程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的過程，表示逆轉(zhuǎn)錄．過程Ⅱ先使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開，再以單鏈的DNA合成雙鏈的DNA，最后利用RCR技術(shù)進(jìn)行DNA復(fù)制．
2、PCR技術(shù)的原理是模擬生物體內(nèi)DNA分子復(fù)制的過程，利用DNA分子熱變形原理，通過控制溫度控制控制DNA分子的解聚和結(jié)合，DNA分子體內(nèi)復(fù)制過程DNA的解旋是在解旋酶的作用下實(shí)現(xiàn)的；PCR擴(kuò)增DNA片段過程最高經(jīng)過n次擴(kuò)增，形成的DNA分子數(shù)是2ⁿ個，其中只有2條單鏈不含有引物．

解答 解：（1）過程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的過程，表示逆轉(zhuǎn)錄，需要加入緩沖液、原料、RNA提取物、逆轉(zhuǎn)錄酶和引物A等．
（2）過程Ⅱ首先要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活、使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開，該反應(yīng)體系中所用的Taq酶至少應(yīng)能耐受95℃高溫．
（3）決定RT-PCR擴(kuò)增片段的是引物；過程Ⅱ擬對單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，根據(jù)DNA分子半保留復(fù)制特點(diǎn)可知，該過程理論上至少需要2ⁿ-1個引物B．
（4）利用RT-PCR技術(shù)對某些微量RNA病毒進(jìn)行檢測時可提高檢測的靈敏度，原因是增加了待測RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測．
（5）RT-PCR過程中主要借助對溫度的控制，影響酶的活性，從而使得化學(xué)反應(yīng)有序高效地進(jìn)行．
故答案為：
（1）RNA提取物     逆轉(zhuǎn)錄酶
（2）讓逆轉(zhuǎn)錄酶變性失活、使mRNA-cDNA雜合雙鏈解開（答對一點(diǎn)即得分）   95℃
（3）引物      2ⁿ-1
（4）增加了待測RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測
（5）溫度

點(diǎn)評 本題考查了基因工程和PCR技術(shù)及其應(yīng)用過程，對于RNA的逆轉(zhuǎn)錄、DNA分子復(fù)制、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片的理解把握知識點(diǎn)間的內(nèi)在聯(lián)系及堿基互補(bǔ)配對原則的應(yīng)用是解題的關(guān)鍵．