Question

3．常見的釀酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖來進行酒精發(fā)酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖產(chǎn)生酒精，科學家欲從果園的葡萄上或土壤中分離這種酵母菌，操作如下：
（1）制備酵母菌培養(yǎng)基要進行倒平板操作，待平板冷凝后，要將平板倒置，其主要原因是是防止培養(yǎng)皿蓋的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染．獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌入侵．
（2）純化菌株時，通常使用的劃線工具是接種環(huán)．在第二次及以后劃線時，總是從上-次的末端開始劃線，這樣做的目的是將聚集的菌落逐步減少以獲得單個菌落．劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落．造成劃線無菌落可能的操作失誤是接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始．
（3）將自然界中采集到的葡萄帶回實驗室，用無菌水將葡萄皮上的微生物沖洗到無菌的三角瓶中，然后將瓶中的液體用涂布器涂布接種于以木糖為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，在適宜的條件下培養(yǎng)一段時間，獲得能利用木糖的多個酵母菌菌落．實驗中所用培養(yǎng)基按功能屬于選擇培養(yǎng)基．
（4）若要檢測土樣中的酵母菌含量，應采用稀釋涂布平板法．在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)基先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格．然后，將lmL土壤溶液稀釋分別稀釋10倍和100倍，每種稀釋度各在3個平板上分別接人0．lmL稀釋液，經(jīng)1適當培養(yǎng)后，6個平板上的菌落數(shù)分別為59、57、58、2、7和5，據(jù)此可得出每升土壤溶液中的活菌數(shù)為5.8×10⁶個．

Answer 1

分析 1、選擇培養(yǎng)基是指通過培養(yǎng)混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要的種類在這種培養(yǎng)基上是不能生存的．利用選擇培養(yǎng)基和轉基因技術能夠篩選利用葡萄糖和木糖產(chǎn)生酒精，且對酒精的耐受能力強的酵母菌．
2、培養(yǎng)基配制時的注意事項
①全程要求無菌操作，無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還能有效地避免操作者自身被微生物感染．
②培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板．可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，當感覺到錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板．操作時應使錐形瓶的瓶口通過火焰，以防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基．
③平板冷凝后皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，若將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染．
④在倒平板的過程中，不能將培養(yǎng)基濺到皿蓋與皿底之間的部位，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生．

解答 解：（1）為了防止培養(yǎng)皿蓋的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染，制備酵母菌培養(yǎng)基要進行倒平板操作，待平板冷凝后，要將平板倒置．獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌入侵．
（2）純化菌株時，通常使用的劃線工具是接種環(huán)．在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線，這樣做可以將聚集的菌落逐步減少以獲得單個菌落．劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落．造成劃線無菌落可能的操作失誤是接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始．
（3）將自然界中采集到的葡萄帶回實驗室，用無菌水將葡萄皮上的微生物沖洗到無菌的三角瓶中，然后將瓶中的液體用涂布器涂布接種于以木糖為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，在適宜的條件下培養(yǎng)一段時間，獲得能利用木糖的多個酵母菌菌落．實驗中所用培養(yǎng)基按功能屬于選擇培養(yǎng)基．
（4）若要檢測土樣中的酵母菌含量，應采用稀釋涂布平板法．在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)基先行培養(yǎng)了一段時間，用于檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格．稀釋涂布平板法中，一般選用30～300個菌落數(shù)進行計數(shù)，因此采用稀釋10倍和菌落數(shù)分別為59、57、58的進行計算，據(jù)此可得出每升土壤溶液中的活菌數(shù)為=（59+57+58）÷3×10÷（0.1×10^-3）=5.8×10⁶個．
故答案為：
（1）是防止培養(yǎng)皿蓋的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染     防止外來雜菌入侵
（2）接種環(huán)     將聚集的菌落逐步減少以獲得單個菌落    接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始
（3）碳源    菌落     選擇
（4）稀釋涂布平板檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格     5.8×10⁶

點評 本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的有關知識，意在加強學生掌握相關的操作技能，掌握微生物分離與純化的方法．