Question

2．請(qǐng)選出下列正確的操作步驟（　�。�
①土壤取樣                ②稱(chēng)取10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中
③吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布    ④依次稀釋至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷稀釋度．

• A． ①②③④
• B． ①③②④
• C． ①②④③
• D． ①④②③

Answer 1

分析 分離分解尿素的細(xì)菌的過(guò)程是：1．土壤取樣
從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣．先鏟去表層土3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中．
2．制備培養(yǎng)基
準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對(duì)照，用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用．由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒(méi)有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為10³～10⁷．每個(gè)稀釋度下需要3個(gè)選擇培養(yǎng)基，1個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此共需要15個(gè)選擇培養(yǎng)基，5個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基．此外，還需要準(zhǔn)備8個(gè)滅菌的試管和1個(gè)滅菌的移液管．
3．微生物的培養(yǎng)與觀察
將10 g土樣加入盛有90 mL無(wú)菌生理鹽水的錐形瓶中（錐形瓶體積為250 mL），充分搖勻，吸取上清液1 mL，轉(zhuǎn)移至盛有9 mL的生理鹽水的無(wú)菌大試管中，依次等比稀釋至10⁷稀釋度，并按照由10⁷～10³稀釋度的順序分別吸取0.1 mL進(jìn)行平板涂布操作．按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管．
將涂布好的培養(yǎng)皿放在30℃溫度下培養(yǎng)．隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)有不同的菌落產(chǎn)生．比較牛肉膏培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄．
挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生顏色反應(yīng)．
4．細(xì)菌的計(jì)數(shù)
當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目

解答 解：分離分解尿素的細(xì)菌的過(guò)程是：①土壤取樣→②稱(chēng)取10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中→④依次稀釋至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷稀釋度→③吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布．C正確．
故答案為：C．

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查微生物的分和培養(yǎng)，意在強(qiáng)化學(xué)生對(duì)細(xì)菌的培養(yǎng)條件和分離過(guò)程的識(shí)記與理解．