7．我國(guó)目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是乙肝表面抗原蛋白，如圖是將乙肝表面抗原基因轉(zhuǎn)移到煙草細(xì)胞內(nèi)生產(chǎn)乙肝疫苗的示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）過(guò)程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，為了使目的基因正常表達(dá)，其首端必須有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，若限制酶切出了平末端，要選擇T4DNA連接酶 （進(jìn)行連接．
（2）目的基因通過(guò)過(guò)程②進(jìn)入農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)，并在農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)化
（3）將乙肝表面抗原基因?qū)霟煵菁?xì)胞的方法稱為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（4）將乙肝表面抗原基因?qū)霟煵菁?xì)胞后，需要進(jìn)行基因的檢測(cè)與鑒定：首先檢測(cè)煙草細(xì)胞的染色體DNA上是否插入了乙肝表面抗原基因，其次檢測(cè)乙肝表面抗原基因是否轉(zhuǎn)錄處相應(yīng)的mRNA；最后檢測(cè)乙肝表面抗原基因是否翻譯出乙肝抗原蛋白，檢測(cè)的方法是抗原-抗體雜交．

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕蛭膸�(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：
①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；
②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；
③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
圖示中①為基因表達(dá)載體的構(gòu)建，②為目的基因的導(dǎo)入過(guò)程．

解答 解：（1）據(jù)圖示可知，過(guò)程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，RNA聚合酶與其結(jié)合后可以驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄．為了使目的基因正常表達(dá)，其首端必須有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，即啟動(dòng)子，若限制酶切出了平末端，要選擇T4DNA連接酶進(jìn)行連接．
（2）轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程；故目的基因通過(guò)過(guò)程②進(jìn)入農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)，并在農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)化 
（3）將目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，故將乙肝表面抗原基因?qū)霟煵菁?xì)胞的方法稱為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（4）目的基因的檢測(cè)與表達(dá)：分子水平的檢測(cè)有DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)目的基因存在、分子雜交技術(shù)檢測(cè)是否轉(zhuǎn)錄、抗原抗體雜交技術(shù)檢測(cè)基因是否表達(dá)，還有個(gè)體水平的檢測(cè)等；故將乙肝表面抗原基因?qū)霟煵菁?xì)胞后，需要進(jìn)行基因的檢測(cè)與鑒定：首先檢測(cè)煙草細(xì)胞的染色體DNA上是否插入了乙肝表面抗原基因，其次檢測(cè)乙肝表面抗原基因是否轉(zhuǎn)錄處相應(yīng)的mRNA；最后檢測(cè)乙肝表面抗原基因是否翻譯出乙肝抗原蛋白，檢測(cè)的方法是抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建  RNA聚合酶 T4DNA連接酶 
（2）轉(zhuǎn)化 
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 
（4）煙草細(xì)胞的染色體DNA上  乙肝表面抗原基因  抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生掌握基因工程中目的基因檢測(cè)與鑒定的方法，能夠根據(jù)題意判斷個(gè)步驟的名稱和操作，難度中等．

練習(xí)冊(cè)系列答案
相關(guān)習(xí)題

科目：高中生物 來(lái)源：2015-2016學(xué)年河北省邯鄲市上期中生物試卷（解析版） 題型：綜合題

（2015秋•邯鄲校級(jí)期中）如圖是八月份某一晴天一晝夜中棉花植株的CO2吸收和釋放曲線．請(qǐng)回答：

（1）該圖顯示，在一晝夜內(nèi)，影響曲線變化的主要因素是 ．

（2）在曲線的 段，棉花植株同時(shí)進(jìn)行光合作用和呼吸作用．

（3）在曲線的c點(diǎn)，此時(shí)植物既無(wú)吸收CO2，也無(wú)釋放CO2，原因 ．

（4）自c后到g點(diǎn)前，棉花植株表現(xiàn)為吸收CO2，利用CO2的細(xì)胞器是 ．在e處，曲線明顯下降，將阻礙 反應(yīng)的進(jìn)行．

（5）組成棉花纖維細(xì)絲的多糖是 ，該物質(zhì)分子是由許多 分子連接而成的．

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：解答題

18．某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因．利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過(guò)程如圖1所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題．

（1）將抗鹽基因?qū)霟煵菁?xì)胞內(nèi)，使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀，這種新性狀（變異性狀）的來(lái)源屬于基因重組．
（2）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用SalI和HindIII兩種酶對(duì)質(zhì)粒和抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（3）基因工程中的檢測(cè)篩選是一個(gè)重要的步驟．為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，圖2表示運(yùn)用影印培養(yǎng)法（使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法）檢測(cè)基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入了農(nóng)桿菌．
培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有氨芐青霉素、四環(huán)素（氨芐青霉素和四環(huán)素）．從檢測(cè)篩選的結(jié)果分析，含有目的基因的是4和6菌落中的細(xì)菌．為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的抗鹽基因作探針進(jìn)行分子水平檢測(cè)，又要用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株（將煙草植株移栽到鹽堿地中）的方法從個(gè)體水平鑒定煙草植株的耐鹽性．

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：解答題

15．動(dòng)物基因工程最令人興奮的應(yīng)用是建立生物反應(yīng)器來(lái)生產(chǎn)重要醫(yī)藥產(chǎn)品．抗凝血酶Ⅲ蛋白是一種血漿糖蛋白，臨床上主要用于血液性疾病的治療．下圖為培育轉(zhuǎn)基因奶牛獲得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程圖．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因經(jīng)常采用PCR技術(shù)．過(guò)程①是將抗凝血酶Ⅲ蛋白基因?qū)胧芫�，該過(guò)程常用的方法是顯微注射法．
（2）過(guò)程②包括早期胚胎培養(yǎng)（或“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)”） 技術(shù)和胚胎移植技術(shù)；為獲得多只與該轉(zhuǎn)基因奶牛遺傳物質(zhì)相同的牛犢，在過(guò)程②還可使用胚胎分割技術(shù)．
（3）若要檢測(cè)牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（4）如果檢測(cè)發(fā)現(xiàn)抗凝血酶Ⅲ蛋白基因被成功導(dǎo)入了受精卵，但卻沒(méi)有檢測(cè)到抗凝血酶Ⅲ蛋白的存在，那應(yīng)該考慮分別位于目的基因首端的啟動(dòng)子和末端的終止子沒(méi)有設(shè)計(jì)好，應(yīng)從這方面進(jìn)一步改善．

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：解答題

2．為研究不同濃度的生長(zhǎng)素類似物2，4-D對(duì)豬籠草插條的影響，研究人員做了如下實(shí)驗(yàn)：取生長(zhǎng)狀態(tài)相似的三年生植株，剪取長(zhǎng)度相同的插條120段，每段保留1片嫩葉．將插條隨機(jī)均分成四組，采用浸泡法處理24h后扦插．在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下．請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題．

（1）保留嫩葉的插條比較容易成活，是因?yàn)槟廴~能產(chǎn)生生長(zhǎng)素促進(jìn)插條生根．處理插條時(shí)除了使用浸泡法外，還可使用沾蘸法法．后者的2，4-D溶液的濃度應(yīng)比浸泡法的高．
（2）表中數(shù)據(jù)能否說(shuō)明2，4-D對(duì)插條生根具有兩重性？否．理由是與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組對(duì)插條生根均表現(xiàn)為促進(jìn)作用，因此不能說(shuō)具有兩重性．
（3）本實(shí)驗(yàn)的結(jié)論是在一定范圍內(nèi)，2，4-D既能促進(jìn)插條生根也能促進(jìn)插條生長(zhǎng)；2，4-D促進(jìn)插條生根的最適濃度為50mg/L．
（4）在進(jìn)一步探究2，4-D促進(jìn)插條伸長(zhǎng)的最適濃度時(shí)，可根據(jù)株高數(shù)據(jù)判斷所配制的2，4-D溶液的起始濃度應(yīng)為50mg/L．

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：選擇題

12．下列關(guān)于物質(zhì)出入細(xì)胞方式的敘述，正確的是（　　）
A．自由擴(kuò)散的速率通常要比易化擴(kuò)散的速率大
B．小分子物質(zhì)不可能通過(guò)胞吐的方式運(yùn)出細(xì)胞
C．神經(jīng)遞質(zhì)與突觸后膜受體蛋白結(jié)合時(shí)，使通道蛋白形變
D．胞吐過(guò)程不一定會(huì)發(fā)生分泌泡與質(zhì)膜的融合

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：選擇題

19．下列關(guān)于線粒體的敘述，正確的是（　�。�
A．外膜的面積比內(nèi)膜的大B．外膜蛋白質(zhì)與脂質(zhì)的比例高于內(nèi)膜
C．既能產(chǎn)生水，也要消耗水D．含有DNA，不含RNA

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：解答題

16．材料一：人類可利用轉(zhuǎn)基因番茄作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)人胰島素．所用的人胰島素基因是依據(jù)植物“偏愛(ài)”的密碼子來(lái)設(shè)計(jì)所含的密碼子，通過(guò)人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在胰島素-COOH端加上KDEL內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，避免胰島素在植物細(xì)胞中的降解．將該基因置于果實(shí)專一性啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)之下通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入番茄中，在番茄的果實(shí)中表達(dá)人胰島素．
材料二：T4溶菌酶在溫度較高時(shí)易失去活性，科學(xué)家對(duì)編碼T4溶菌酶的基因進(jìn)行改造，使其表達(dá)的T4溶菌酶的第3位的異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼�，在該半胱氨酸與第97位的半胱氨酸之間形成了一個(gè)二硫鍵，提高了T4溶菌酶的耐熱性．
（1）材料一中基因工程操作是采用人工合成方法獲得目的基因的．獲得的人胰島素基因與人體細(xì)胞中胰島素基因中編碼氨基酸的堿基序列不同，但兩者所編碼的蛋白質(zhì)中氨基酸序列相同，這是因?yàn)槊艽a子具有簡(jiǎn)并性（或一種氨基酸有多個(gè)密碼子），基因序列不同，蛋白質(zhì)可以相同．要想在體外獲得大量該目的基因的片段，可以采用PCR技術(shù)．
（2）根據(jù)上述描述，轉(zhuǎn)基因操作時(shí)所用的載體是農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，載體上的T-DNA可以轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上．
（3）材料二屬于蛋白質(zhì)工程范疇．該工程是指以分子生物學(xué)相關(guān)理論為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新蛋白質(zhì)的技術(shù)．

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：選擇題

14．純合白皮、抗霜霉病黃瓜與純合綠皮、感霜霉病黃瓜雜交，F(xiàn)1代全表現(xiàn)為白皮、抗�。瓼1自交得到F2，如F2中抗病與感病的性狀分離比為3：1．果皮的性狀分離比為：白皮：黃皮：綠皮約為12：3：1，下列判斷正確的是（　　）
A．抗病與感病的這一性狀遺傳符合自由組合定律
B．控制果皮顏色的是一對(duì)等位基因，雜合子表型為黃色
C．將F2中感病、綠皮植株與感病、黃皮雜交，子代出現(xiàn)1：1性狀分離
D．若兩對(duì)性狀遺傳符合自由組合定律，F(xiàn)2中表現(xiàn)型為抗病、白皮植株占總數(shù)$\frac{9}{16}$

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同步練習(xí)冊(cè)答案