Question

6．人和哺乳動物的尿中含有尿素，環(huán)境中大量尿素的存在會造成污染．土壤中有些細菌含有脲酶，可通過降解尿素作為其生長的氮源．某研究小組對土壤中的這類細菌進行分離，用以回收氮源同時凈化環(huán)境．請回答下列相關問題：
（1）分離培養(yǎng)細菌時必須進行無菌操作．培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌法．配制培養(yǎng)基時，滅菌與調節(jié)pH的先后順序是先調PH，后滅菌．
（2）采用稀釋涂布平板法法將樣液進行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)．在稀釋土壤溶液的過程中每一步都要在酒精燈火焰旁進行操作．接種后的培養(yǎng)皿倒置于37℃的恒溫箱中培養(yǎng)．
（3）用以尿素為唯一氮源培養(yǎng)基篩獲得能分泌脲酶的細菌，從功能上劃分該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．若培養(yǎng)基中存在有脲酶的細菌，其菌落周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是由于尿素被分解產生氨，遇培養(yǎng)基中加入的酚紅指示劑產生的顏色變化，從而證明這一菌株可以尿素為氮源．變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力越強．

Answer 1

分析 實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌（如接種環(huán)）、干熱滅菌（如培養(yǎng)皿）、高壓蒸汽滅菌（如培養(yǎng)基）等．無菌操作要求在整個實驗過程中操作都在酒精燈火焰附近進行，以避免周圍微生物的污染．微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法．稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)．

解答 解：（1）培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌法滅菌．培養(yǎng)基制作時應該先調整pH，再滅菌．
（2）采用稀釋涂布平板法將樣液進行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)；為避免雜菌污染，操作要在酒精燈火焰旁操作，為防止水蒸氣在皿蓋上凝結會產生水滴，培養(yǎng)皿需要倒置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)．
（3）篩選和分離尿素分解菌時，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基．在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素分解菌產生的脲酶能夠將尿素分解成氨可使PH呈堿性而出現(xiàn)紅色環(huán)帶，變色區(qū)域越大，說明其分解能力越強．
故答案為：
（1）高壓蒸汽滅菌    先調PH，后滅菌
（2）稀釋涂布平板法　酒精燈火焰　倒置
（3）以尿素為唯一氮源　選擇　紅色環(huán)帶　氨　越強

點評 本題以脲酶為素材，考查微生物的分離和培養(yǎng)、以氮素為氮源測定能生長的細菌的數(shù)量，要求考生識記無菌技術，特別是實驗室常用的消毒和滅菌方法；掌握培養(yǎng)基的種類，能應用相應的培養(yǎng)基對土壤中的含有脲酶的細菌進行分離．