Question

【題目】神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）是血管內(nèi)皮生長因子的新型受體，通過參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進(jìn)腫瘤血管的生成。本研究將為NRP-1單克隆抗體靶向治療乳腺癌提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

（1）取乳腺癌（MCF7）組織塊，運(yùn)用__________技術(shù)獲得MCF7細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。用重組的人_________蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行注射，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，制備雜交瘤細(xì)胞，將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，吸取培養(yǎng)孔中的__________（填“上清液”或“沉淀細(xì)胞”），應(yīng)用__________技術(shù)進(jìn)行抗體陽性檢測。經(jīng)多次篩選和細(xì)胞培養(yǎng)，獲得NRP-1單克隆抗體（NRP-1 MAb）。

（2）提取正常組織細(xì)胞和MCF7細(xì)胞的總蛋白，設(shè)置空白對(duì)照，加入NRP-1 MAb進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明了__________。

（3）將MCF7細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，等量注入4組裸鼠右前腋下，接種后3天開始給藥，共給藥7次。每隔5天測算一次腫瘤的體積，如下圖所示：

對(duì)照組注射__________，從上圖中可以看出__________。

（4）結(jié)合題干信息，綜合以上研究請你推測NRP-1 MAb抑制腫瘤的作用機(jī)理是__________。

（5）注射不同劑量NRP-1 MAb 33天后，剝離腫瘤組織稱重，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖：

從該結(jié)果中可以看出____。綜合比較（3）和（5）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可見中高劑量和低劑量的NRP-1 MAb在降低腫瘤體積和降低腫瘤重量上出現(xiàn)了不一致性。

（6）基于以上研究，科學(xué)家們對(duì)該抗體的用藥方式有兩種觀點(diǎn)：謹(jǐn)慎用藥和適宜濃度用藥。你支持哪個(gè)觀點(diǎn)，并說出理由______。

Answer 1

【答案】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1） 上清液 抗原—抗體雜交技術(shù) NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá) 等量的生理鹽水 NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的效果更顯著 NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá)，NRP-1 MAb與NRP-1特異性結(jié)合，阻斷了血管內(nèi)皮生長因子與NRP-1的結(jié)合，抑制了腫瘤血管生成，進(jìn)而降低了腫瘤的體積。 NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤組織的重量，中、高劑量抗體的降低效果稍微沒有低濃度的好，不同劑量降低效果的差異并不顯著。 支持謹(jǐn)慎用藥理由：隨著治療時(shí)間的延長，這種不一致性可能會(huì)加大，應(yīng)進(jìn)行后續(xù)研究，現(xiàn)階段謹(jǐn)慎用藥。支持適宜濃度用藥理由：該抗體已經(jīng)顯示了顯著的抑瘤效果，這種不一致性很小，可以考慮適宜濃度用藥

【解析】

動(dòng)物細(xì)胞融合，又稱細(xì)胞雜交，指將兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程，融合后形成具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。

單克隆抗體制備的過程中需要經(jīng)過兩次篩選，第一次用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次用專一抗體檢測篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。

（1）取乳腺癌（MCF7）組織塊，需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶進(jìn)行分散處理后，運(yùn)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得MCF7細(xì)胞。要制備NRP-1單克隆抗體，需要用重組的人NRP-1蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行注射，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的漿細(xì)胞，與該漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合處理，制備雜交瘤細(xì)胞。將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)到多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，可以從培養(yǎng)液即上清液中提取到單克隆抗體，可以用抗原-抗體雜交技術(shù)進(jìn)行抗體陽性檢測。經(jīng)多次篩選和細(xì)胞培養(yǎng)，獲得NRP-1單克隆抗體（NRP-1 MAb）。

（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，只有MCF7細(xì)胞中蛋白可以與NRP-1 MAb發(fā)生免疫反應(yīng)，說明NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá)。

（3）實(shí)驗(yàn)的自變量是給藥的劑量和時(shí)間，因變量是腫瘤的體積，對(duì)照組應(yīng)該注射等量的生理鹽水，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的效果更顯著。

（4）根據(jù)“神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）是血管內(nèi)皮生長因子的新型受體，通過參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進(jìn)腫瘤血管的生成”及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤的體積可知，NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá)，NRP-1 MAb與NRP-1特異性結(jié)合，阻斷了血管內(nèi)皮生長因子與NRP-1的結(jié)合，抑制了腫瘤血管生成，進(jìn)而降低了腫瘤的體積。

（5）注射不同劑量NRP-1 MAb 33天后，剝離腫瘤組織稱重，根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤組織的重量，中、高劑量抗體的降低效果稍微沒有低濃度的好，不同劑量降低效果的差異并不顯著。

（6）綜合比較（3）和（5）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可見中高劑量和低劑量的NRP-1 MAb在降低腫瘤體積和降低腫瘤重量上出現(xiàn)了不一致性。根據(jù)上述研究結(jié)果可知，隨著治療時(shí)間的延長，這種不一致性可能會(huì)加大，應(yīng)進(jìn)行后續(xù)研究，故現(xiàn)階段應(yīng)該支持謹(jǐn)慎用藥。