Question

12．科學(xué)家利用基因工程和細(xì)胞核移植技術(shù)培育了綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬．基本流程是：從熒光水母中獲取目的基因，與有關(guān)載體重組，將其導(dǎo)入豬胎兒的成纖維細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后再將成纖維細(xì)胞核植入去核的卵母細(xì)胞中，最后培養(yǎng)出轉(zhuǎn)基因克隆豬．
（1）成纖維細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)分裂到表面相互接觸時(shí)，就會(huì)停止分裂，這種現(xiàn)象叫做細(xì)胞的接觸抑制．若將成纖維細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，操作時(shí)首先用胰蛋白酶處理成細(xì)胞懸液．
（2）作為核移植受體細(xì)胞的去核卵母細(xì)胞一般處在MⅡ中（減數(shù)第二次分裂中）期．供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞中，常通過(guò)電脈沖（或電激）（物理方法）激活重組細(xì)胞，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程．
（3）培養(yǎng)重組細(xì)胞時(shí)，將細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按其種類、數(shù)量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基稱為合成培養(yǎng)基，但通常在培養(yǎng)基中還需要加入適量的血清（或血漿）等天然成分．細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%的CO₂的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO₂的主要作用是調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH．為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素．

Answer 1

分析 1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：
（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．

解答 解：（1）細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)分裂到表面相互接觸時(shí)，就會(huì)停止分裂，這種現(xiàn)象叫做細(xì)胞的接觸抑制．若將成纖維細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，操作時(shí)首先用胰蛋白酶處理成細(xì)胞懸液．
（2）選取處在MⅡ中（減數(shù)第二次分裂中）期的去核卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞；通過(guò)電脈沖（或電刺激）激活重組細(xì)胞，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育進(jìn)程．
（3）將細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按其種類、數(shù)量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基稱為合成培養(yǎng)基．動(dòng)物細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)． 細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%的CO₂的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO₂的主要作用是調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH．為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素．
故答案為：
（1）接觸抑制    胰蛋白酶
（2）MⅡ中（減數(shù)第二次分裂中）   電脈沖（或電激）
（3）合成     血清（或血漿）     調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH      抗生素

點(diǎn)評(píng) 本題著重考查了基因工程、胚胎工程等方面的知識(shí)，意在考查考生能識(shí)記并理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，形成一定知識(shí)網(wǎng)絡(luò)的能力，并且具有一定的分析能力和理解能力．