Question

【題目】酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來(lái)源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類(lèi)酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的____________________，及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行____________________滅菌。

（2）取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約_______________（在25 ℃、50 ℃或80 ℃中選擇）的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。

（3）挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有___________________。

a．為保證無(wú)菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌

b．劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落

c．挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量

d．可以通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株

（4）步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過(guò)程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和__________________供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1000倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，用25×16型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上_______色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于__________，才能達(dá)到每毫升3×109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。

Answer 1

【答案】pH 高壓蒸汽（濕熱） 50 ℃ a、b、d 氧氣 無(wú) 30

【解析】

配制培養(yǎng)基的操作步驟為稱量→溶化→定容→調(diào)pH→培養(yǎng)基的分裝→包扎→滅菌。據(jù)圖分析，從土壤樣品中分離該類(lèi)酵母的實(shí)驗(yàn)流程為①稱量土樣→②梯度稀釋→③平板澆注分離→④劃線純化→⑤擴(kuò)大培養(yǎng)。

（1）配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量、溶化，然后調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，接著利用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。

（2）在步驟③中待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時(shí)倒平板。

（3）接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌，做到無(wú)菌操作，a正確；劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以防止大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落，b正確；該實(shí)驗(yàn)的目的是獲得利用工業(yè)廢甲醇作為碳源的酵母菌，不需要測(cè)定酵母菌中的甲醇含量，c錯(cuò)誤；可以通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株，d正確。

（4）酵母菌通過(guò)有氧呼吸大量繁殖，因此為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過(guò)程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣；活細(xì)胞膜具有選擇透過(guò)性，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，無(wú)色細(xì)胞才能計(jì)數(shù)；為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1000倍后，用25×16型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)（假設(shè)為n），達(dá)到每毫升3×109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度，而臺(tái)盼藍(lán)與菌液等體積加入，則n÷80×400÷（0.1×103）×1000÷2=3×109，n=30，即每個(gè)中方格中酵母菌不少于30。